mRNA甲基化修饰

云序生物对ac4C RNA乙酰化检测手段为acRIP-Seq技术，技术原理如下： 将乙酰化RNA特异性抗体与被随机打断的RNA的片段进行共孵育，抓取有乙酰化修饰的片段进行测序；同时需要平行测序一个对照（Input）样本，对照样本只含有打断的RNA的片段，并不添加RNA乙酰化特异性抗体与其共孵育。对照样本用于消除非特异性抓取的乙酰化片段的背景。对比免疫共沉淀（IP）样本和对照样本（Input）中的序列片段，将RNA乙酰化修饰位点定位到转录组上，并根据RNA-seq数据，计算样本中RNA乙酰化程度及对RNA表达水平的影响。在全转录范围内及tRNA水平查看基因m5C甲基化修饰水平。mRNA甲基化修饰

样品要求 样品类型 细胞、组织或RNA，其他样本类型请电询。 样品量 a）细胞：≥2×107 b）组织：500mg - 1g c) RNA：30μg - 300μg d) 超微量满足500ng - 30μg 样品运输与保存 样品运输：样品置于1.5mL离心管中，封口膜封好，干冰运输。 样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存；RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。云序优势 一站式服务： 客户只需提供细胞、组织或RNA，云序生物为您完成从MeRIP富集，文库制备，上机测序到数据分析整套服务流程。m6A RNA甲基化机制RNA 修饰在基因表达调控中扮演着非常重要的角色。

案例1：拟南芥花叶根组织m6ARNA甲基化谱原文：Transcriptome-widehigh-throughputdeepm6A-seqrevealsuniquedifferentialm6AmethylationpatternsbetweenthreeorgansinArabidopsisthaliana期刊：GenomeBiology影响因子：13.21西北农林科技大学联合中科院和普渡大学，借助m6ARNA甲基化测序技术，对比拟南芥花，叶，根组织中（每种组织有两个生物学重复）m6ARNA甲基化情况。结果发现检测组织中m6ARNA甲基化修饰程度比人类高10%左右，占转录组的83%。

案例1：m5CRNA甲基化调控mRNA出核新机制原文：5-methylcytosinepromotesmRNAexport—NSUN2asthemethyltransferaseandALYREFasanm5Creader期刊：CellResearch影响因子：15.60中科院汪海林等研究团队揭示了m5C修饰在mRNA的分布图谱规律及其对调控mRNA出核作用新机制。研究人员建立了改进的RNAm5C单碱基分辨率高通量测序与生物信息分析技术，以此揭示mRNAm5C的分布规律，并绘制了精细的m5C修饰图谱，发现m5C在mRNA的翻译起始位点下游有明显富集，并且主要分布于CG富集区域。通过分析对比人和小鼠不同组织，发现m5C在mRNA上的分布特征在哺乳动物中十分保守，而在不同组织中修饰的基因具有特异性。研究团队同时发现，在小鼠睾丸发育过程中，动态的m5C修饰基因明显富集于精子发育相关功能，提示m5C修饰参与生殖发育调控。包括：mRNA 5’帽子结构、mRNA内部、pri-miRNA、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）。

案例3：拟南芥m5CRNA甲基化谱及TRM4B酶对根的影响原文：Transcriptome-WideMappingofRNA5-MethylcytosineinArabidopsismRNAsandNoncodingRNAs期刊：ThePlantCell影响因子：8.23与上篇不同，本研究团队采用m5CRNA甲基化测序研究拟南芥中m5C甲基化谱，在种子，幼芽，根中发现了1000多个特异性的位点。敲低RNAm5C甲基转移酶TRM4B，造成tRNA稳定性的降低。研究人员还证实TRM4B突变体的初级根比野生型更短，同时对氧化的应激反应更敏感。种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中，占到了 RNA甲基化修饰的80%。福建ctDNA甲基化

m6A除了分布在 mRNA 中，也出现在很多非编码 RNA中 ，如：环状RNA 、LncRNA等。mRNA甲基化修饰

案例2：2’-O-RNA甲基化酶FTSJ3协助HIV病毒逃避宿主细胞免疫识别机制原文：FTSJ3isanRNA2’-O-methyltransferaserecruitedbyHIVtoavoidinnateimmunesensing期刊：Nature影响因子：41.6外国研究人员首先借助蛋白互作实验证实TRBP蛋白能够在不依赖于DICER酶的作用下与FTSJ3结合，形成复合物，因此推测，FTSJ3是一种2-O-甲基化转移酶。接着，体外和体内实验表明FTSJ3就是一种通过TRBP被招募到HIVRNA上的2-O-甲基化转移酶。通过优化的2’-O-RNA甲基化测序手段，证实在HIV病毒遗传信息的特定位置上存在依赖于FTSJ3的2-O-甲基化修饰。综上，该研究证实TRBP-FTSJ3复合物通过招募到HIV病毒RNA发生2-O-甲基化从而解释了HIV病毒逃避宿主细胞先天免疫识别的机制。mRNA甲基化修饰

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