山东m7G环状RNA实时定量PCR

中国医学科学院放射医学研究所刘强团队利用云序生物提供的全转录组测序服务成功揭示了circRNAs在小鼠空肠辐射后表达的变化，为研究circRNAs在辐射致肠损伤中的作用提供了靶分子。高质量的测序技术对每一个环状的表达都做到准确检测，生信分析可视化从宏观角度（染色体分布、成环位置）给出了所有对于放射处理后在小鼠空肠组织当中环状RNA分子的表达情况。筛选差异表达的环状RNA进行环状RNA定量PCR验证，GO分析揭示包括结合、催化、细胞因子和细胞分泌等GO条目均发生富集。KEGG分析预测结果显示差异环状RNA的靶基因与MAPK信号通路相关，理论与预测完全相符。海绵机制预测ceRNA网络图，按照海绵机制的反式调控方式，该网络中包括42个上调和48个下调的环状RNA分子，以及预测相互结合的22个靶基因mRNA。1993年在小鼠精子决定基因Sry中发现环状转录。山东m7G环状RNA实时定量PCR

一、环状RNA表达谱：作者将50个CRC患者和50个正常人的血清样品分别随机分为5组均匀混样，对混样后的5v5个样品进行了外泌体全转录组测序,检测到1924个环状RNA,来源基因在各染色体上均有分布，环状大部分长度小于500nt。二、CRC患者和健康人中环状RNA的差异表达接着作者筛选出了122个在CRC与健康人血清外泌体中差异表达的环状RNA，其中100个明显上调，22个明显下调。其中65个为新发现的环状RNA。三、差异环状RNA的功能预测通过对环状RNA来源基因的GO分析预测差异环状RNA的功能，结果显示上调的环状的潜在功能富集在蛋白修饰和细胞对内源性刺激的反应相关功能，高尔基体相关功能。此外KEGG分析还找到了这些基因参与的4个相关通路。四川外泌体环状测序大多数来源于外显子，少部分由内含子直接环化形成。

云序专注于环状RNA研究，前期环状RNA筛选，云序提供全转录组及环状RNA测序相关服务；环状RNA验证，云序提供qPCR，RNaseR及Sanger测序等服务；文中环状RNA机制研究金钥匙——环状RNAPullDown及RIP环状RNA测序，云序均可提供全套服务！新年伊始，云序客户更是在环状RNA领域接连发表高分文章，包括世界首篇小鼠大脑创伤外泌体环状RNA文章；世界首篇非洲爪蟾环状RNA文章以及世界首篇红斑狼疮性肾炎环状RNA文章等等。云序致力于帮助客户在环状RNA研究领域占得先机，拔得头筹！

研究一：环状RNA分子筛选及验证为探索造血干细胞功能相关的circRNA分子，作者比较了小鼠不同造血干细胞（LT-HSC，ST-HSC和MPPs）中全转录组变化情况，找出了156种明显性差异表达的circRNA分子，其中49种在LT-HSC中高表达。RNaseR及qPCR实验证实其中9种为真实LT-HSC中高表达环状RNA分子。为有效筛选造血干细胞相关的circRNA分子，作者通过体内circRNA干扰实验，发现只有干扰Cia-cGAS后才能明显影响小鼠体内造血干细胞亚群分布，并表现为LSK祖细胞数量明显增加，与此同时LT-HSC细胞数量明显减少。因此，作者结合转录组数据以及体内、体外验证实验，锚定Cia-cGAS分子进行后续分子机制研究。m6A环状RNA测序，云序生物提供成熟m6A RNA甲基化MeRIP-seq服务。

研究思路：本文首先基于高通量手段比较了小鼠中LT-HSC，ST-HSC和MPPs中全转录组变化，共发现156种明显性差异表达的circRNAs。表达量验证证实9个circRNA在LT-HSC中明显性上调。在细胞表型层面，发现只有干扰D430042O09Rik转录的circRNA——Cia-cGAS后，可明显改变造血干细胞的亚群分布，作者因此锚定Cia-cGAS进行机制分析。作者通过Cas-9基因敲除策略成功构建了Cia-cGAS基因敲除小鼠，在Cia-cGAS基因敲除小鼠中LT-HSC明显性减少，I型IFN表达升高。通过RNAPull-down实验，作者发现Cia-cGAS可以与cGAS结合，cGAS-RIP实验反向证实二者之间具有直接的相互作用。后续，作者通过生信预测结合EMSA实验分析了Cia-cGAS与cGAS相互作用的位点信息。酶学研究证明，Cia-cGAS可通过结合cGAS并抑制其活性。目前对m6A RNA流行检测手段为MeRIP-Seq技术。北京环状全转录组测序

circRNA形成没有3’末端和5’末端的共价环状结构。山东m7G环状RNA实时定量PCR

胶质瘤作为较常见的颅内恶性tumour占颅脑tumour的40%~50%，电磁辐射等其他环境致cancer因素会导致胶质瘤的发生，尽管手术切除、术后放疗、药物化疗等方法可以作为主流的胶质瘤医治手段，但是多形性胶质母细胞瘤（GBM）的强侵袭、增殖能力仍给病人的医治造成很大的困难。上海第二军医大学附属长征医院研究者通过环状RNA测序，从环状RNA角度对胶质瘤的发生和发展进行了研究， 共发现206个上调环状和1205个下调环状，其中扩大样本量qPCR验证（13例正常、68例疾病）后将目标锁定在circBRAF。该环状转录自BRAF基因，虽然在正常人样本当中BRAF基因编码的环状cricBRAF分子mRNA分子水平无明显差异，但是在疾病样本当中circBRAF有明显上调，KM曲线结合临床资料表明该环状的高表达能一定程度上预示着疾病的恶性程度和预后情况。山东m7G环状RNA实时定量PCR

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