江苏文章 表观遗传组测序内容

EM-seq的优势相比于传统的WGBS拥有多种优势：DNA测序文库质量高、所需DNA起始量小相比于WGBS，EM-seq对DNA的损伤小，因此可以用更少DNA样品、更少的PCR轮数扩增出高质量的测序文库。云序生物提供的EM-seq服务，所需的DNA起始量可低至10ng。DNA文库的插入片段更长、更完整相比于WGBS，EM-seq处理后的DNA的片段更完整，长度更长，避免产生测序缺口。出色的GC覆盖均一性无论GC程度高低，EM-seq的覆盖度都有均匀且优良的表现；相比之下，WGBS测序文库高估了AT区，却低估了GC区，造成“GC覆盖度偏误”。而将相对较小的环状DNA称为eccDNA。江苏文章 表观遗传组测序内容

案例：hMeDIP-seq揭示了心机细胞发育与肥大过程中的基因表达与5hmC有关 DNA hydroxymethylation controls cardiomyocyte gene expression in development and hypertrophy[J].Greco C M, Kunderfranco P, Rubino M, et al . Nature Communications, 2016, 7:12418. 5-hmC（DNA羟甲基化）在基因体上富集能够激huo基因的转录调控，但对启动子和远端调节区的功能不太清楚。本文主要是以不同发育时间点和心肌肥大的心肌细胞为实验载体，主要剖析5-hmC在心肌细胞（CMC）基因组中的分布，并揭示了5-hmC在心脏发育和疾病中的作用机制。1）通过DNA羟甲基化测序，作者发现在心脏发育过程中，CMCs中的5-hmC在基因间区域逐渐减少，并向GB上富集（图1）。2）通过DNA羟甲基化和转录组关联分析，作者得出5-hmC是CMCs发育和肥大过程中的重要调控因子（图2）。西藏技术表观遗传组测序血清、血浆、体液样品，液氮速冻后-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融。

全基因组重亚硫酸盐测序法（Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS）一度是 DNA 5mC 测序的金标，可以将未经化学修饰的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），并在后续的扩增和测序过程中被读取为胸腺嘧啶（T），同时保持甲基化修饰的 5mC 和羟甲基化修饰的 5hmC 在测序中仍被读取为 C。然而，WGBS 法需要极端的温度和化学环境，容易造成 DNA 的断裂降解；并且，WGBS 法对未经化学修饰的胞嘧啶（C）具有高比例的破坏力，致使 GC 富集区相比于 AT 富集区更容易丢失，在测序文库中造成“GC 覆盖度偏误”。 由于 ctDNA 含量低、稳定性差，若采用 WGBS 法对 ctDNA 进行 5mC 测序，将会难以避免地带来很多负面影响： 经化学处理后所得的 DNA 总量低，难以满足测序文库所需的量； DNA 丢失严重，覆盖度低，容易造成测序缺口（gap）； GC 检测覆盖程度不均一，未能反应真实情况。

均一的双核苷酸分布由于“GC覆盖度偏误”的存在，在连续双核苷酸的检出效率方面，WGBS对于不同的双核苷酸存在较严重的偏误，而EM-seq则能展示出均一的覆盖情况。更强的匹配率和更低的重复率相比于WGBS，EM-seq测序结果与参考基因组的匹配率更高，同时重复率更低。用更少的测序检出更多的CpG岛同等测序覆盖深度的情形下，EM-seq所发现的CpG数目要远多于WGBS，在这其中有很大比例的CpG位点是只能能用EM-seq法才能检测到的。云序生物提供的MeDIP测序服务，将甲基化DNA免疫共沉淀技术（MeDIP）和高通量测序相结合，能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱，并比较不同样品中的甲基化分布差异。云序生物环状DNA甲基化测序技术基于转座酶和m5C位点酶学转化方法。

案例2：鼻细胞表观基因甲基化作为儿童哮chuan和气道炎症生物标志物的研究期刊：NatureCommunication影响因子：11.878本文作者研究团队首先借助850K甲基化芯片平台对547名儿童鼻孔细胞表观基因组做了DNA甲基化检测分析，并对当前的哮chuan、变应原致敏、变应性鼻炎、呼出气一氧化氮(FeNO)和肺功能进行了鼻表观基因组关联分析(EWAS)。结果显示DNA差异甲基化主要发生在哮chuan相关基因、参与Th2和嗜酸性反应的基因、以及可能改变呼吸上皮的通透性和功能的基因。作者还发现发现随着过敏和哮chuan生物标志物的升高，表观遗传年龄会加速。综上所述，鼻细胞外基因组甲基化可以作为哮chuan、过敏和气道气道炎症的敏感生物标志物，以及这些表型的特异性生物学过程。客户只需提供血清血浆，云序生物为您完成环状DNA富集，甲基化位点转化。广西平台表观遗传组测序文章

ctDNA羟甲基化检测为日后通过血浆样本进行无创诊断奠定了良好的基础。江苏文章 表观遗传组测序内容

早在十九世纪后期，科学家就通过显微镜观察到了蛋白质与 DNA 直接的相互作用，从那以后，他们开始深入探索蛋白质结合并控制 DNA 的作用机制。为了研究 DPI，科学家发明了很多方法：凝胶阻滞、DNaseI 足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq 等。其中 ChIP-Seq 因其能真实、完整地反映结合在 DNA 序列上的靶蛋白，是目前全基因组水平研究 DPI 的标准实验技术。 ChIP-Seq 的基本过程包括甲醛交联将细胞内与 DNA 结合的蛋白固定，再裂解细胞，超声断裂 DNA，将 DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上，再用可以结合抗体的 ProteinA 磁珠将抗体-蛋白-DNA 复合物抓取下来，之后将 DNA 与蛋白解离，将 DNA的片段补平，加 A，加接头，进行高通量测序。江苏文章 表观遗传组测序内容

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