青海修饰表观遗传组测序研究

案例1：孕妇血浆中胎儿环状DNA的特征是：呈甲基化状态以及被clear原文：CharacteristicsofFetalExtrachromosomalCircularDNAinMaternalPlasma:MethylationStatusandClearance期刊：ClinicalChemistry影响因子：8.322近期，NIPT之父卢煜明教授团队开发了一种环状DNA甲基化分析的测序方案，通过对不同产后时间点的胎儿环状DNA含量的评估，研究了胎儿环状DNA的体外clear效率。作者还发现血浆中的胎儿环状DNA与母体环状DNA相比甲基化程度相对较低。此外，和胎儿线性DNA类似，胎儿环状DNA在分娩后从母血中迅速clear。总之，该团队基于转座酶和m5C位点酶学转化方法开发出了环状DNA甲基化测序技术，并揭示了孕妇血浆中的胎儿环状DNA甲基化状况，为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。由此可见，由于其结构和表达的特异性，环状DNA可以影响细胞生命活动。青海修饰表观遗传组测序研究

为了研究DPI，科学家发明了很多方法：凝胶阻滞、DNaseI足迹实验、甲基化干扰、体内足迹、酵母单杂、ChIP-Seq等。其中ChIP-Seq因其能真实、完整地反映结合在DNA序列上的靶蛋白，是目前全基因组水平研究DPI的标准实验技术。ChIP-Seq的基本过程包括甲醛交联将细胞内与DNA结合的蛋白固定，再裂解细胞，超声断裂DNA，将DNA-蛋白质复合物结合在特异性抗体上，再用可以结合抗体的ProteinA磁珠将抗体-蛋白-DNA复合物抓取下来，之后将DNA与蛋白解离，将DNA的片段补平，加A，加接头，进行高通量测序。然而，由于ChIP-Seq实验过程中的甲醛交联、染色质片段化、免疫共沉淀以及文库构建等步骤繁琐且条件难以控制，常规ChIP-Seq实验需要大量细胞，且实验重复性差、信噪比低。四川云序表观遗传组测序并揭示了孕妇血浆中的胎儿环状DNA甲基化状况。

染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是研究蛋白质与DNA相互作用的经典技术，被普遍应用于转录因子结合位点或组蛋白修饰位点的研究。 云序生物提供的ChIP-Seq服务，将ChIP和高通量测序技术结合，在全基因组范围内检测与特定转录因子或组蛋白结合的DNA位点。配合强大的生信分析实力，云序生物提供的不仅是海量的测序数据，而且是根据您的研究目的，有针对性地挖掘提炼出取之即可用的结果及出版级图片。云序生物提供的MeDIP测序服务，将甲基化DNA免疫共沉淀技术（MeDIP）和高通量测序相结合，能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱，并比较不同样品中的甲基化分布差异。

全基因组重亚硫酸盐测序法（Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS）一度是 DNA 5mC 测序的金标，可以将未经化学修饰的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），并在后续的扩增和测序过程中被读取为胸腺嘧啶（T），同时保持甲基化修饰的 5mC 和羟甲基化修饰的 5hmC 在测序中仍被读取为 C。然而，WGBS 法需要极端的温度和化学环境，容易造成 DNA 的断裂降解；并且，WGBS 法对未经化学修饰的胞嘧啶（C）具有高比例的破坏力，致使 GC 富集区相比于 AT 富集区更容易丢失，在测序文库中造成“GC 覆盖度偏误”。 由于 ctDNA 含量低、稳定性差，若采用 WGBS 法对 ctDNA 进行 5mC 测序，将会难以避免地带来很多负面影响： 经化学处理后所得的 DNA 总量低，难以满足测序文库所需的量； DNA 丢失严重，覆盖度低，容易造成测序缺口（gap）； GC 检测覆盖程度不均一，未能反应真实情况。云序生物率先推出ctDNA甲基化测序服务，需1ng ctDNA既可进行测序。

乳腺ai转移确诊后，患者已经很少能够彻底痊愈。但是现在，我们可以利用含有tumsor染色体异质性的ctDNA来对乳腺ai进行检测。在HSaal教授的研究中，他们对20例早期确诊的原发性乳腺ai患者进行了监测和长期随访。通过NGS和液体数字PCR联合使用的方法，他们能够覆盖很多低信号的全基因组测序结果，并且first发现，在手术后，ctDNA监测是高度精确的，其成功监测预示了93%的复发病人以及100%的没有复发的病人。基于ctDNA的监测中，转移患者的平均生存期是11个月，而在患者的长期不进展期的时候，是没有检测到ctDNA的。因此，ctDNA能够预测不良生存期。这些发现表明，我们可以利用ctDNA来监测早期乳腺ai患者的转移情况，并帮助修改治疗方案，避免过度医治。目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA。四川分析表观遗传组测序

同时检测环状DNA及其甲基化状况，节约样品，性价比高。青海修饰表观遗传组测序研究

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