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多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。 所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理,液氮冻存后-80℃保存。吉林修饰外泌体结果

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1983年,外泌体于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为“Exosome”。随后的10年,外泌体并未受到足够的重视。 直至1996年,G.Raposo发现类似于B淋巴细胞能分泌抗原提呈外泌体,这种外泌体携带MHC-Ⅱ类分子、共刺激因子和粘附因子。研究表明这种B细胞来源的外泌体可以直接刺激效应CD4+细胞的抗tumour反应。 1998年,L.Zitvogel等发现树突细胞(DC cell)也能产生有抗原提呈能力的外泌体,而且外泌体含有功能性的MHC-Ⅰ类和Ⅱ类分子,还有共刺激因子。这种外泌体启动了特异性的CTL杀伤作用,促进了T细胞依赖的抗tumour效应。广东云序生物外泌体平台外泌体对凝血和血管生成其促进作用。

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外泌体(Exosomes)是一种直径在40~100 nm的圆形单层膜结构,是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分,如微小RNA ( microRNA,miRNA)、长链非编码RNA和mRNA、环状RNA(circular RNA,circRNA)。外泌体所携带的这些RNA统称为外泌体来源RNA,具有完整的序列结构和生物活性。外泌体中大约含几百种miRNAs,通过外泌体miRNA测序,研究人员可获得与疾病相关的遗传特征(生物标志物),为将来tumour医治领域通过液体活检来寻找有效药 物。

虽然研究者对细胞释放外泌体的具体过程知之甚少,但大多数含有内膜系统的哺乳动物细胞均可分泌外泌体。外泌体有多种分泌途径:一种是组成型分泌途径,例如免疫系统的B细胞、树突状细胞(DCs)和肥大细胞,对外泌体的研究大部分来自于免疫细胞,而目前在非免疫细胞中生理性外泌体的分泌很大程度上是未知的;另一种途径是通过细胞间相互作用刺激分泌外泌体,例如鼠DCs在与抗原特异性CD4+ T淋巴细胞相互作用时可分泌更高水平的外泌体[4];其他类型的细胞还可以通过钙离子载体或其他刺激分泌外泌体[5]。离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。

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超过4 600种蛋白质与外泌体有关。外泌体蛋白有以下几类:①外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关,外泌体含有的细胞质蛋白,如膜蛋白和RAB蛋白,可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放;Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程,促进内体膜的凹陷。②外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质,如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ,其在免疫调节中发挥重要作用,MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白,如HSP70和HSP90,促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。③外泌体含有信号转导蛋白,如G蛋白和蛋白激酶。④外泌体含有丰富的蛋白水解酶,这表明外泌体能够促进细胞转移。⑤外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。免疫磁珠法:可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。宁夏云序外泌体

外泌体发表的文章也绝大部分与其在tumour的形成,耐药性,检测等方面有关。吉林修饰外泌体结果

另外,MSC来源的外泌体还可以有效地促进骨折的愈合、保护修复肾损伤,心肌衰弱、及后肢局部缺血的医治,以及调节促进肌肉的再生等。动物实验中,应用MSC外泌体对于卵巢细胞衰老的医治中,起到了明显的效果。更有体外细胞实验验证,人脐带间充质干细胞分泌的外泌体能够有效抑制顺铂诱导的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡,提高细胞的生存率。 与传统的干细胞疗法不同,外泌体不是活细胞,因此在被注射到身体的受损伤部位后,不会发展成为ai细胞。因此,外泌体可能作为替代干细胞医治的新策略正在迅速获得重视,并且能够克服细胞医治中的诸多风险和困难。吉林修饰外泌体结果

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