差速离心法分离外泌体的实验原理:离心管内粒子的速度,由三种力(离心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力)的平衡决定,如:其中geff为离心力(加速度),R为旋转半径,即粒子距旋转轴的距离,ω为旋转角频率...
逆转录实验过程中要注意RNA样品的保存、纯化、处理和转录酶的选择,逆转录实验前要对反应体系进行无RNA和无反转录酶的对照。多逆转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。①RNA指导的DNA聚合酶活...
外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法,这是外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块,由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究...
加尾法逆转录的较大特点在于:对于抽提纯化的miRNA,进行无差别加尾。因此,如果用户需要对样本中的多个miRNA进行考察,一次逆转录即可完成对所有qPCR模板的制备。qPCR引物方面,miRNA以及内...
DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的,能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化,从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化苄的这一特性,将植物样品冻结融解后,...
外泌体的提取主要包括以下几种方式:一是色谱法,这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一,但是需要特殊的设备,应用不普遍。二是微流控分离法,该方法通过负压及震荡等机械原理分离外泌体,产量纯度均具有较大幅度...
外泌体蛋白质特征是:膜结合四跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81和CD82),以及常规用于分离的EpCAM和Rab5。其他公认的蛋白质是受体(CD46和CD55)、热休克蛋白(HSP;Hsc70、Hs...
DNA提取的几种方法介绍,水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去,然后将沉淀溶于水中,使充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积...
DNA提取方法:一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,所得DNA大小为100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白...
反转录酶的注意事项,在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:RNA:成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中...
外泌体分离方法之筛分分离法:该技术是通过膜从生物液体中筛分外泌体并通过压力或电泳进行过滤来分离外泌体。筛分分离法的分离时间较短,但分离的外泌体纯度却处于较高的水平。筛分分离法的缺点在于分离的外泌体回收...
反转录酶的选择:反转录酶(Reversetranscriptase)又称逆转录酶。是以RNA为模板指导dNTP合成互补DNA(cDNA)的酶。一部分反转录酶具有RNA酶活性,能够在转录后降解RNA-D...