逆转录(reversetranscription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。此过程中,核酸合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向(RNA到DNA)相反,故称为逆转录。逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别,但是逆转录是某些病毒的自主行为,如逆转录病毒,它们在整合到宿主细胞内前以RNA为模板形成DNA的过程;反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工合成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程,但地点不同,相对性的来说,逆转录在体内,反转录在体外。逆转录是许多病毒复制中必不可少的步骤。北京miQP2反转录稳定性高
人体中也有逆转录过程,比如端粒的复制。端粒(telomere)是染色体末端的特殊结构,由重复的DNA序列(TTAGGG)和核的蛋白组成,可以保护染色体末端,维持基因组完整性。端粒的末端是单链3'末端,形成一种紧凑的T环结构,可保持其稳定性。其表面覆盖着Shelterin复合物,包括TRF1(端粒重复结合因子1)、TRF2(端粒重复结合因子2)、TIN2(TRF1相互作用核的蛋白2)、RAP1(rif相关蛋白)、POT1(端粒保护)和TPP1(端粒保护蛋白1)成功将人表皮干细胞体外分离培养的基础上,对比观察不同发育阶段人表皮干细胞端粒酶反转录酶表达的差异特征,结果表明人胚胎、少儿、成人皮肤来源的表皮干细胞均有端粒酶反转录酶表达,其表达强度依次减弱。提示诱导和增强端粒酶反转录酶的表达对维持表皮干细胞在体外自我更新和增殖能力可能具有重要意义。miQP2逆转录蛋白检测逆转录后的DNA可用于构建基因工程载体。
逆转录的作用:除了病毒外,逆转录还在其他方面发挥了重要的作用。例如,在一些动物体内,逆转录过程会导致基因的重组。这种重组可以使新的基因产生,从而使动物产生新的特征。此外,逆转录还可以作为某些基因的调节机制,从而控制基因的表达和功能。逆转录的研究一直是生物学领域的热点之一。研究人员希望通过了解逆转录酶的工作机制,从而找到一些新的方法来治着某些疾病。例如,在艾滋毒的研究中,研究人员发现了一些能够抑制逆转录酶活性的药物,从而使得病毒无法复制。这些药物已经被普遍应用于艾滋的治着中,并且取得了明显的疗效。
反转录酶的注意事项,在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:RNA:成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在首先链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂只防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。逆转录PCR在检测病毒、诊断疾病等方面有普遍应用。
茎环法逆转录技术具有许多优点。首先,该技术可以在样品数量较少的情况下扩增RNA分子,从而避免了RNA样品的纯化和浓缩操作。其次,茎环法逆转录技术可以特异性地扩增目标RNA分子,避免了随机引物引起的非特异扩增,从而提高了检测的准确性和可靠性。此外,茎环法逆转录技术可以扩增RNA的全长,而不只只是RNA的片段,从而可以更全部地了解RNA的结构和功能。茎环法逆转录技术在分子生物学和医学研究中得到了普遍的应用。例如,在基因表达和调控的研究中,茎环法逆转录技术可以用来研究mRNA的表达模式和在细胞内的分布状态。此外,在病毒学研究中,茎环法逆转录技术可以被用来检测病毒RNA的存在和浓度。在病症诊断和治着中,茎环法逆转录技术可以用来检测和分析病细胞中的疙瘩标志物。逆转录现象说明:至少在某些生物中,RNA同样兼有遗传信息传递和表达功能。miQP2逆转录蛋白检测
逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充。北京miQP2反转录稳定性高
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