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外泌体基本参数
  • 品牌
  • 苏州英泽生物医药科技有限公司
  • 型号
  • 型号齐全
外泌体企业商机

外泌体的物理表征方法:常用的外泌体物理表征方法是基于显微镜的方法,例如透射电子显微镜、扫描电子显微镜、低温电子显微镜和原子力显微镜;动态光散射;纳米粒子跟踪分析;可调电阻脉冲传感;和单个EV分析等。用于分析外泌体浓度、定量和概况的分子生物方法主要包括:实时定量PCR、数字PCR技术(基于芯片的dPCR、液滴数字PCR、ddPCR)、蛋白质免疫印迹、全基因组测序(next-generationsequencing)、exome-targetedsequencing(下一代测序)、微阵列图谱技术和ELISA技术等。外泌体的纯化可以通过单颗粒色谱等技术实现。长沙血浆外泌体制造商

外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法,这是外泌体提取较常用的方法。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足,电镜鉴定时发现外泌体聚集成块,由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准,也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心,这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法,用此种方法分离到的外泌体纯度高,但是前期准备工作繁杂,耗时,量少。上海组织提取外泌体企业可将不同分离方法结合使用,以提高外泌体分离的效率和分离精度。

外泌体可以传递生物分子,例如蛋白质、DNA、mRNA等,影响接收器细胞的表现型和生理活性。外泌体可通过特定的组装和功能修饰,提高其对宿主细胞的选择性靶向性。核酸是在外泌体中发现的另一组主要颗粒,即DNA和RNA,它们可以在细胞中发挥功能作用。在源自小鼠和人类肥大细胞的外泌体中发现了约1300种mRNA、121种miRNA和>100种小RNA,但未检测到DNA和rRNA。在外泌体中发现的其他miRNA是lin-4和let-7,以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌体对人类细胞的刺激可以导致人类细胞中小鼠蛋白质的合成。此外,外泌体和受体细胞的mRNA谱不同,表明mRNA被主动分选为MVB。

外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡,普遍存在于血液、唾液、尿液及乳汁等体液中,具有细胞信使功能,参与细胞通讯。外泌体是目前为止定义较为明确的细胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),其生成过程、释放途径、大小及功能区别于微囊泡(Microvesicles)和凋亡小体(Apoptosisbodies)。外泌体是内吞起源的小(40–100nm)囊泡群。外泌体和脱落的囊泡都含有特定的蛋白质组、RNA和,dsDNA等。不同的细胞外环境富含不同类型的细胞外囊泡。即使由相同的细胞类型形成,不同类别的囊泡也具有不同的核酸特征。分离外泌体的方法:细胞碎片、凋亡体、外泌体和其他EV一起存在于生物体液中,具有密度、形状、大小和表面蛋白等物理性质的外泌体是分离机制的基础。结合两种或多种分离方法有助于有效地将外泌体与其他干扰成分分离。外泌体分离是外泌体研究中的重要步骤。

使用差速离心法分离外泌体主要需要注意的是转子的选择。“摆动桶”(SW)转子和“定角”(FA)转子,这些转子的几何形状根本不同,因此沉降特性也不同。这些转子之间的主要区别在于:FA转子,与旋转半径相比,沉积颗粒的较大路径长度通常较小,允许近似恒定迁移率并简化描述。然而,第二个区别是圆形FA管的水平横截面是椭圆形的,不同粒子的路径长度根据轨迹与椭圆长轴的距离而不同。由于较短的路径长度,外面颗粒可能沉降得更快,需要根据不同的实验需要进行选择。外泌体可通过特定的组装和功能修饰,提高其对宿主细胞的选择性靶向性。上海组织提取外泌体企业

的外泌体分离技术采用了磁珠分离和滤膜分离的方法。长沙血浆外泌体制造商

分离外泌体的方法之静水过滤透析:它主要有助于将整个EV从高度稀释的溶液中分离出来,而无需超速离心过程。280Musante等人展示了用于从尿液样本中分离EV的HFD方案。在HFD的初始步骤中,用2000×g离心样品以去除细胞,细菌和碎片作为沉淀。然后,将上清液保存在透析膜(1000kPa)中,1000kPa或更小的颗粒相应地以静水压差通过膜。较后,通过离心将外泌体囊泡沉降40,000×g。在HFD分离过程中,外泌体级分在早期阶段恢复,与多步离心相比,这被认为是一个优势。与超速离心相比,HFD也被认为是一种有效的方法。长沙血浆外泌体制造商

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