当外泌体在1983年头次被发现后,其被认为是细胞排泄废物的一种方式,如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、疙瘩侵袭等方方面面。有研究表明疙瘩来源的外泌体参与到疙瘩细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了疙瘩的生长与侵袭。外泌体可通过血液或其他体液传播,从而在远离原发灶的部位诱导细胞生长和转移。合肥快速提取外泌体蛋白检测
外泌体的物理表征方法:常用的外泌体物理表征方法是基于显微镜的方法,例如透射电子显微镜、扫描电子显微镜、低温电子显微镜和原子力显微镜;动态光散射;纳米粒子跟踪分析;可调电阻脉冲传感;和单个EV分析等。用于分析外泌体浓度、定量和概况的分子生物方法主要包括:实时定量PCR、数字PCR技术(基于芯片的dPCR、液滴数字PCR、ddPCR)、蛋白质免疫印迹、全基因组测序(next-generationsequencing)、exome-targetedsequencing(下一代测序)、微阵列图谱技术和ELISA技术等。青岛快速提取外泌体分离费用外泌体可通过细胞间物质转移影响细胞的增殖、分化和生物学行为。
细胞外泌体的来源和表征方法:细胞外泌体是直径为30-150nm的血管外囊泡亚群。在过去的20年里,科学家已经从包括正常细胞和病细胞在内的许多细胞类型中分离出外泌体,并且研究了它们对其他细胞的影响。外泌体是由多种大分子组成,例如核酸、蛋白质和脂质。细胞外泌体具有天然的特定细胞靶向特性,通常被设计用于靶向大分子(DNA和RNA)和药物递送系统(多柔比星、紫杉醇和紫杉醇)。目前常用细胞外泌体的分离方法主要是超速离心法、密度梯度离心法、超滤分离法、基于聚合物的沉淀法、亲和沉淀分离法、免疫磁珠法和色谱法等。
外泌体是由正常或病理条件下的细胞所分泌,含有各种膜蛋白和胞质蛋白。因此,外泌体蛋白也可以作为生物试剂潜在地用于蛋白诊断。外泌体中发现的十种蛋白质主要包括热休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌动蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、烯醇化酶1α、细胞溶质热休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶打开蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌体蛋白属于各种功能组,例如四跨膜蛋白(CD9、CD63和CD81)、热休克蛋白(HSC70和HSC90)、膜转运蛋白(GTPases)和脂质结合蛋白。外泌体标记物及其在免疫组织化学、免疫细胞化学、流式细胞术和ELISA等抗体应用中的常用的单克隆抗体。外泌体在人体的主要作用是充当局部和全身信号和调节系统。
使用差速离心法分离外泌体主要需要注意的是转子的选择。“摆动桶”(SW)转子和“定角”(FA)转子,这些转子的几何形状根本不同,因此沉降特性也不同。这些转子之间的主要区别在于:FA转子,与旋转半径相比,沉积颗粒的较大路径长度通常较小,允许近似恒定迁移率并简化描述。然而,第二个区别是圆形FA管的水平横截面是椭圆形的,不同粒子的路径长度根据轨迹与椭圆长轴的距离而不同。由于较短的路径长度,外面颗粒可能沉降得更快,需要根据不同的实验需要进行选择。外泌体通过它们携带的间质基质组分,在宿主细胞中诱导上皮间质转化等重要的生物学反应。合肥快速提取外泌体蛋白检测
外泌体在很多生理和病理情况下都发挥着不可或缺的作用。合肥快速提取外泌体蛋白检测
外泌体分离方法之尺寸排阻层析法:尺寸排阻层析法也被称为凝胶过滤层析法,这种方法是基于凝胶孔的大小和外泌体的大小,大于凝胶孔径的颗粒被洗脱;反之,小于凝胶孔径的颗粒将被抑制。凝胶过滤层析分离法总体上能获得较高的纯度和产量。建议与超滤相结合,这种方法可提供更少的蛋白质污染和更高的外泌体回收率。凝胶过滤层析分离法的缺点是凝胶的成本过高。外泌体分离方法之声学流体分离:声学流体分离技术利用声场根据粒子的大小、密度和可压缩性来分离粒子。生物样品在此过程中不会受到损坏,并且分离的本身是非接触式、高效的和无标记的。合肥快速提取外泌体蛋白检测