外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体头次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。外泌体在疙瘩微环境中的参与，反映了其具有的高度的异质性和复杂性。南京血液DNA外泌体
分离外泌体的方法之超滤：它使用孔径为50-450nm的膜过滤器从细胞碎片和较大的EV中分离外泌体。通过使用纳米尺寸的滤膜，可以分离出目标尺寸的外泌体。超滤法通常用作超速离心的后续步骤，以及凝胶过滤和色谱的较后一步。超滤可以通过切向流过滤（TFF）或直流过滤（DFF）方法进行处理。DFF方法也称为死端过滤，存在膜污染和颗粒分离受损的问题。此外，DFF只适用于小体积样品，例如高达30mL的样品。TFF也称为错流过滤是一种更快速、高效和方便的分离大规模外泌体体积的过程，TFF是样品流体切向流过滤膜并避免形成滤饼或堵塞的过程。南京血液DNA外泌体外泌体介导的RNA转移对基因表达水平和遗传数据传递具有重要的调节作用。
分离外泌体的方法之超速离心：离心是一种利用不同的离心力根据颗粒成分的密度、大小和形状沉淀颗粒成分的过程。超速离心是一种离心过程，较多使用6×106g离心力，有助于隔离更小的组件，例如，核糖体、蛋白质、病毒、外泌体和其他EV。加速度（g）、旋转半径、样品粘度和沉降路径长度是有效分离外泌体的决定因素。20至250nm之间的粒径分数可以通过超速离心分离，随后的离心或尺寸排阻过程产生所需的外泌体。超速离心法被认为是外泌体分离的金标准方法，外泌体需要1×105至2×105g离心1小时。在顺序离心过程中，MVs、凋亡小体、细胞碎片、细胞和其他具有较高浮力密度的颗粒在外泌体之前沉淀。然而，必须注意的是，由于密度和大小重叠，大多数当前方法只能富集小EV（即外泌体）。
外泌体分离方法之免疫学分离方法：免疫学分离法是利用受位于外泌体膜中的选定蛋白质标记物影响的抗体对外泌体进行标记。这些标记的外泌体可以进一步轻松处理和纯化，例如，使用微芯片或磁珠。磁分离后，外泌体被纯化，磁珠被溶解和去除。通过这种简单快速的方法，就可以获得较高纯度提取物，但不会分离出缺乏磁性标记抗体识别的表面标记的外泌体，这可能导致外泌体池表现效果不佳。这种方法虽然既省时又直接，输出纯度较高，但也需要较为昂贵的试剂。外泌体的定量检测和分析可作为疾病诊断和治着中的新型指标。
外泌体的表征分析：动态光散射：使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析仪测定外泌体制剂中的粒度分布。动态光散射测量由于溶液中粒子的布朗运动引起的散射光强度的动态波动，（685nm的激光，检测角度为15、90、175度）；较小的粒子比较大的粒子移动得更快。确定颗粒大小时，通常使用三种分布类型：(1)数量分布，报告不同大小“箱”中的颗粒数量；(2)体积分布报告不同尺寸类别的颗粒总体积；(3)强度分布，报告不同大小颗粒散射的光。也可以使用高分辨率纳米粒径分析仪NanocoulterⅠ来分析样品中每种大小的囊泡的实际数量、浓度及粒子动态、Zeta电位等。为了进行分析，将先前储存在-20°C的75μl等分试样的外泌体制剂用925μlPBS稀释（得到1ml）并转移到一次性比色皿中用于DLS测量。外泌体作为一种重要的细胞通讯方式，在生物学和医学研究中具有普遍的应用前景。南京血液DNA外泌体
外泌体携带的小分子物质（如ATP、GTP等）参与细胞生命活动、代谢、细胞生长和分化等生物学进程。南京血液DNA外泌体
外泌体分离方法优缺点对比：差速离心法：差速离心法仍是实验中常用的外泌体分离技术。主要步骤如下：1.使用离心机低速离心来去除细胞与细胞碎片。2.而后增加转速通过离心来消除样本中较大的细胞囊泡。3.再使用高速离心机进行高速离心，通过离心沉淀的方式提取外泌体。在这里，需要注意的是生物流体的粘度与分离的外泌体的纯度有较强的相关性。所以，对于高粘度的生物样品需要超速离心机进行较长时间的离心操作。外泌体分离方法之免疫分离法：免疫芯片方法基于表面外泌体受体，用于根据来源分离外泌体。获得的外泌体可直接分析或用于DNA或总RNA分离。外泌体胞内蛋白可用作分离外泌体的特异性标志物。此外，基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分离外泌体。其原理是：使用涂有外泌体抗体的ExoTEST板，可以从各种生物体液中分离出外泌体。该方法适用于常见和细胞类型特异性外泌体蛋白的检测、分析和定量。南京血液DNA外泌体
