河北复杂基质支原体检测方法学验证

支原体是一类无细胞壁的原核微生物，直径只有 0.1-0.8 µm，常规 0.22 µm 细菌过滤器无法有效去除，其污染在细胞培养领域极为普遍。这类微生物会严重干扰培养细胞的表型特征与正常生长，给生物制品质量安全带来极大隐患，且与细菌、真菌污染不同，支原体污染通常不会导致培养液浑浊或细胞可见病变，需通过专业方法检测。基于此，FDA、WHO 等全球监管机构及 USP、EP、ChP 等主流药典均明确要求，对测试细胞库（主细胞库、工作细胞库）、下游细胞培养物、终产品及对照细胞等关键环节开展支原体污染筛查，确保生物制品生产全流程安全可控。

细胞和基因治疗领域正加速发展，国内以 CAR-T、间充质干细胞、AAV 基因治疗等新型生物制品势头正盛。这类产品与传统制药差异明显，给支原体检测带来全新挑战：批产量小但批次多，多数待检测样品含高达 10⁷个活细胞，且基质复杂如高蛋白、全血、高浓度质粒等。更关键的是，新型生物制品终末灭菌难度极大，需从起始材料、原物料到全工艺过程严格控污，而支原体污染隐蔽性强、危害大，成为质量安全控制的主要痛点，也推动着检测方法向更高效、抗干扰的方向升级。

2023 年美国国立卫生研究院（NIH）的对比研究得出一个结论是并非所有商业化支原体检测试剂盒都能满足替代传统方法的要求，研究对市面上 5 款主流试剂盒（ATCC、梅里埃、赛默飞、罗氏、MB）进行测试，发现不同试剂盒对不同支原体菌株的检测灵敏度差异明显，部分产品无法达到宣称的≤10 CFU/mL 检测限（符合欧、日药典替代培养法的要求）。例如，ATCC 试剂盒对莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体的检测限只为 100 CFU/mL，MB 试剂盒对硬蜱螺原体无法检出（>1000 CFU/mL）。这一现象表明，试剂盒的检测性能与支原体菌株特性密切相关，因此企业需根据待测样品的原辅料来源和检测目的，对试剂盒进行严格的性能验证，避免因检测限不达标导致质量风险。

湖州申科支原体检测解决方案优势突出，一是产品验证专业：严格确认菌株 GC 比，可溯源至 ATCC/CVCC，专属性验证涵盖多种梭菌、乳杆菌、链球菌，完全符合 EP 要求，而部分竞品未明确菌株验证标准或缺乏近缘菌交叉污染测试；二是菌株资源丰富：提供可溯源、可商用的验证菌株，严格控制 GC 比，联合合规机构共同标定；三是一站式解决方案：涵盖 “产品 + 菌株 + 技术服务” 全链条，拥有上市药物方法变更验证服务案例，可提供全申报周期支持；四是申报案例丰富：积累了 BLA、IND 阶段的多个成功案例，支持客户完成国产替代与方法变更，竞品申报案例相对有限，且部分企业规模较小，难以接受供应商审计，服务稳定性不足。

MycoSHENTEK^® 支原体 DNA 检测试剂盒参照 EP 2.6.7 和 JP XVII 支原体检测相关要求完成全面性能验证，是经过三方室间验证、性能完全符合药典标准的支原体检测试剂盒。该试剂盒检测灵敏度高达 10CFU/mL，可同时替代传统培养法与指示细胞培养法，大幅缩短检测周期。经实验验证，其对鸡滑液支原体、猪鼻支原体、莱氏无胆甾支原体等多种常见污染菌株的检出率均达到 100%（24/24），即使对口腔支原体等低浓度菌株，检出率也满足 95% 以上。凭借覆盖范围广、灵敏度高、性能稳定、合规性强的关键优势，该试剂盒为生物制品企业提供了高效、可靠的支原体检测工具，助力企业满足全球监管要求并保障产品质量。

湖州申科推出的 MycoSHENTEK^® 支原体验证菌株，符合全球药典要求，目前已提供口腔支原体、肺炎支原体、猪鼻支原体三种菌株，后续将逐步扩充其他验证用菌株。该系列菌株溯源至全球保藏机构并获得正式授权，经培养法测定 CFU（菌落形成单位）与 dPCR 法测定 GC（基因组拷贝数），实现准确定量标定，浓度涵盖 10CFU 和 100CFU 两种规格，每盒含 3 管，完全满足支原体检测方法验证需求。菌株经灭活处理，无风险，使用时只需加入相应体积样品基质即可开展验证，操作便捷，同时通过双重定量检测确保质量可控，为 NAT 方法验证提供可靠的标准物质支撑。