上海单抗药物用宿主细胞蛋白（HCP）残留检测

中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生产中常用的动物细胞表达系统，广泛应用于抗体、重组蛋白、疫苗等产品的制备。采用 CHO 细胞作为宿主进行生产时，难免会引入宿主细胞蛋白（HCP）杂质；即便 HCP 残留量较低，仍可能存在免疫原性，还会带来降低产品蛋白稳定性等风险。因此，需对生物制品中的 HCP 残留进行定量分析，从而保障纯化工艺的一致性与终产品的安全性。SHENTEK^®CHO 宿主细胞蛋白（HCP ）残留检测试剂盒实现了关键试剂的全国产化，其通过 CHO 细胞（K1&S）补料分批培养工艺制备 HCPs，再以此免疫绵羊获取抗体，适用于检测 CHO 细胞系表达的生物制品（如单抗、重组蛋白、疫苗等）中的 HCP 残留。该试剂盒具有操作步骤少、检测速度快、专一性强、性能稳定可靠的特点。

由于 HCPs 属于复杂的多分析物，为制备覆盖率尽可能高的抗体（以覆盖工艺特有的高风险 HCPs），需采用可靠的免疫策略。获得符合性能要求的抗体后，需借助经过验证的 2D 或 LC-MS 方法对抗体覆盖率进行表征，确保抗体可充分覆盖各实际工艺下产生的 HCPs。在拥有代表性抗原与优良性能抗体的基础上，开展 ELISA 检测体系开发，涵盖原辅料筛选与制备研究、各组分工艺及反应体系研究、稳定性研究等重要内容。检测体系开发完成后，需依据 ICH 及药典要求开展分析方法验证评估，确保体系的线性、范围、检测限、定量限、准确度、精密度、专属性及耐用性均满足法规要求。

LC-MS技术作为生物制品宿主细胞蛋白（HCP）残留检测的新趋势，应用时需重点考虑以下五方面：①稳定性：需对HCPs的LC-MS检测流程开展验证，全流程需实施严格QC管控，以保障检测结果的一致性与稳定性。②可重复性：不同类型生物制品中HCPs的提取效率存在差异，且不同人员操作会产生偏差，因此需在上机前通过多种方法评估HCPs提取效率，规避人为因素导致的结果重复性不佳问题。③准确度：在方法开发与验证阶段，需设置内标并确定定量算法，通过内标响应回算得出HCPs含量，以此保证定量结果的准确性。④抗干扰能力：高丰度蛋白与特殊基质会干扰质谱检测，需借助前处理手段去除高丰度蛋白或特殊基质，从而降低其对HCPs肽段质谱检测的影响。⑤真实性：样品中除HCPs外的其他物质在质谱分析中也会产生质谱信号，需去除复杂背景噪音以避免假阳性与假阴性情况，同时建立规范的生信分析流程。在分析流程搭建过程中，同样需制定严格的QC标准，并通过后续多种方法验证，明确该标准的真实性。

湖州申科运用免疫磁珠分离技术（IMBS），搭配 2D 电泳或 LC-MS 技术评估抗体覆盖率。IMBS 的主要流程涵盖：多克隆抗体与磁珠的偶联反应、磁珠未结合位点的封闭处理、HCP 样本与结合抗体的磁珠共同孵育反应。该过程中，HCP 抗体会结合可识别的 HCP，未被识别的 HCP 则通过后续洗涤步骤去除，随后借助低 pH 等洗脱条件，收集抗体捕获的 HCP。此方法具备 AAE（抗体亲和提取，Antibody Affinity Extraction）免疫层析柱分离的全部优势，同时免疫磁珠可在悬浮状态下与 HCP 样品充分混匀并结合，HCP 结合效果更优；且依托磁珠吸附，能减少 HCP 与填料的非特异性吸附，进一步提升实验准确性。

方法选择是影响宿主细胞蛋白（HCP）残留检测结果的因素之一。酶联免疫吸附法（ELISA）与液相色谱 - 质谱联用技术（LC-MS），是当前 HCP 检测领域的两类常用方法。据文献统计，当前在总 HCP 定量检测中，ELISA 仍为主流技术；而 MS 法可用于特定蛋白（如高风险蛋白）的鉴定与定量，已成为重要的互补手段。此外，检测过程中所用试剂与耗材的质量，会直接影响检测结果的准确性。质量不达标的试剂，可能引发检测结果出现假阳性或假阴性。举例来说，若抗体的特异性与亲和力不足，可能在 ELISA 检测中产生交叉反应；若抗原代表性不足或抗体覆盖率偏低，则可能造成漏检；而稀释液抗干扰能力较弱时，也会对检测准确性产生影响。相关案例研究显示，采用定制化方法替代原有商业化试剂盒后，抗原代表性与抗体覆盖率明显提升，HCP 检测值也呈现整体升高的趋势。

美国药典 USP 通则 <1132.1>《质谱法测定生物药中残留宿主细胞蛋白》（Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），主要内容是介绍 LC-MS 技术在宿主细胞残留蛋白检测中的应用。该通则围绕样品制备、质谱测试条件建立、数据分析、质谱方法验证等维度，详细说明质谱技术应用于 HCPs 检测的优势及需注意的事项。作为先进的分析技术平台，质谱技术在 HCPs 分析中的应用，无论是单独使用，还是与 ELISA 及其他分析方法联合使用，都能帮助生产企业在产品全生命周期中更清晰地理解并建立 HCPs 检测方法，进而保障产品质量稳定。