美国FDA要求对于采用γ-逆转录病毒载体和慢病毒载体的产品，需要在整个生产过程及不同阶段进行RCR复制型逆转录病毒／RCL复制型慢病毒检测，针对载体生产用主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、载体上清液及在体外培养超过4天的载体转到细胞进行检测。针对慢病毒载体使用时RCL的检测，除了金标准——指示细胞...

实时荧光定量PCR（qPCR）技术在生物制品质量控制方面应用非常普遍，如宿主细胞残留DNA检测，鼠源、禽源等外源病毒检测，微生物快检（支原体、分枝杆菌、细菌、zhen菌等），复制型病毒检测（RCL、RCR、rcAAV等）、质粒拷贝数检测及其它工艺杂质检测等。qPCR检测结果以扩增曲线图呈现，正常扩增...

美国药典USP40〈1223〉对NAT法支原体检测产品有关性能验证的要求，包括专属性、检测限（LOD）、耐用性、重现性。其中对于专属性的定义及验证方法如下：定义：替代性定性微生物方法的特异性定义为其检测特定于该技术的一系列挑战微生物的能力。“微生物范围”可以定义为**对患者或产品风险的有限数...

细胞培养时做支原体检测是至关重要的。支原体在自然界分布普遍，无细胞壁，直径为0.1-0.3μm，且形态易变，极易通过除菌过滤器。细胞培养被支原体污染是极普遍的问题，在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。面对支原体污染给细胞培养带来的...

磁珠法核酸提取过程中的常见误区--某一种磁珠好，就应该在所有试剂配方中使用效果都好磁珠的种类是多种多样的，粒径大小不同，分散性不同，磁响应时间不同，包被基础基质不同，外层修饰官能团不同，包被密度不同，官能团臂长不同，会导致磁珠特性千差万别。所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。就像同样是核酸提取...

宿主细胞残留DNA检测：南京正扬生物自主研发生产的HEK293宿主细胞残留DNA检测片段化分析试剂盒，采用荧光定量PCR法，可同步实现对残留DNA和特定大小的DNA片段的定量测定。产品针对靶标序列设计扩增不同大小产物的引物和探针，分别对扩增的4种不同大小片段设置检测体系并建立标准曲线，根据对应扩增片...

南京正扬生物的宿主细胞残留核酸提取试剂盒手工操作步骤：1.向离心管（自备）中加入100μL样本，做好标记和记录。2.加入25μL裂解液1，充分涡旋混匀25s后，瞬时离心。℃消化30min。4.待样本消化完毕后，瞬时离心，待用。5.加入200μL裂解液结合液，涡旋混匀10s，瞬时离心。6....

用qPCR法进行rcAAV复制型腺相关病毒检测时，出现扩增曲线复孔间荧光信号值降低及复孔间扩增曲线重复性差的原因可能是什么？复孔间部分曲线荧光信号值降低的现象比较常见，通常与反应管内存在气泡相关，随反应温度升高，气泡破裂导致荧光信号值降低。上机前需仔细检查反应管内是否有气泡残留。另外，针对加样误差引...

磁珠法核酸提取是纳米科技与生物技术的完美结合，具有其他DNA提取方法无法比拟的优势，主要体现在：1、能够实现自动化、高通量操作，配合96孔的核酸自动提取仪，在以往做一个样品的提取时间内可同时实现对96个样品的处理，效率直接提高96倍，满足了当前生物学高通量操作的要求，使得在大规模**爆发时能够...

磁珠法核酸提取常见问题之磁珠结块：导致磁珠结块的可能原因：①磁珠吸附了过多杂质，包括蛋白、脂质、多糖等；②磁珠粒径太小；③洗涤完毕，乙醇干燥时间过长。④磁珠磁吸附时间过长；⑤操作中途含磁珠的样品管离心速率过高、离心时间过长；磁珠结块的解决办法：①优化裂解液、结合液配方，将杂质裂解并充分消化；②选择粒...

RCL复制型慢病毒检测：鉴于RCL的潜在威胁，从慢病毒载体生产工艺的各个环节：主细胞库(MCB)、工作细胞库(WCB)、终末端细胞(EOPC)、慢病毒收获液(UPB)、转导细胞甚至CAR-T***病人的临床样本都需要进行严格的质控检测来核实是否存在RCL，从而可以大限度地避免病人因CAR-T治 ...

现行《中国药典》的qPCR检测法中，针对不同的疫苗，其宿主DNA残留量有不同的要求，比如基于vero细胞的狂犬疫苗，DNA残留含量要求不高于3ng/剂，基于vero细胞的脊髓灰质炎疫苗，DNA残留量不高于50pg/剂，基于CHO细胞的乙肝疫苗，DNA残留量不高于10pg/剂。因此，宿主细胞残留DNA...