qPCR法支原体检测程序中，阴性对照（NCS）和空白对照（BLK）的区别：阴性对照（NCS）：为样品稀释液经核酸提取纯化后所得，在提取纯化前同待测样品一样需加入IC，NCS用于监测提取环节是否存在纰漏，比如：操作问题、试剂性能异常、提取环节出现污染等情况；空白对照（BLK）：在PCR检测环节加入的对...

qPCR法RCL/RCR病毒检测：目前许多CAR-T企业采用Q-PCR方法直接测定CAR-T终产品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考虑到CAR-T细胞种产品一般需要新鲜输注的特殊情况，基于细胞培养法的RCL/RCR检测方法周期较长，建议在细胞产品制备过程中进行多面控制(如对慢病毒载体及生产...

核酸提取的质量标准之电泳法：核酸提取后得到的核酸应保持其完整性，不应出现断裂或降解等，电泳可以很好地了解完整核酸的存在，现象因为它是根据分子大小来分离的。低分子产品表明是水解的核酸。在DNA中，存在大约10kbp的高分子部分是合适的材料的良好标志。变性后，纯化的mRNA必须在产品尺寸为8-10kb时...

复制性慢病毒/复制性逆转录病毒检测的背景：慢病毒载体来源于病原体HIV-1，为了保证产品的安全性，目前基因医治产品所用的慢病毒载体/逆转录病毒载体均为非复制性。通过将基因组中的辅助蛋白删除，并将结构基因分别通过3-4个质粒系统进行分别包装，形成三质粒系统或者四质粒系统，如图1所示，极大的降低了产生具...

用qPCR法进行宿主细胞残留DNA检测时，出现扩增曲线异常的可能原因是什么？①如出现非特异性扩增现象：反应管未盖紧或密闭性差引起溶液蒸发而造成。上机前确保管盖密闭，反应结束后查看八联管或96孔板各管液面是否一致。与设备硬件相关，需咨询硬件供应商解决。②如出现扩增曲线不平滑现象：可能与RO...

为什么要做宿主细胞残留DNA检测?众所周知，大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内，所以除了生物活性外，相关部门对药品中杂质的含量要求非常严格。其中，宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险，一直是监管机构关注的重点。生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产，...

用qPCR进行rcAAV复制型腺相关病毒检测时，哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响？前处理过程杂质干扰的去除对qPCR法宿主细胞残留DNA检测结果有着较大影响。样品的前处理操作步骤对DNA检测结果的准确度影响较大，通常采用加样回收试验来进行验证并确定可接受的偏离限度，内标回收率在50...

rcAAV复制型腺相关病毒检测试剂盒（实时荧光定量PCR法）的原理：实时荧光定量PCR是基于PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，产物的增加可以通过荧光信号指示，通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析。实时荧光定量PCR可实时检测产物的生成量，通过加入...

用qPCR法进行rcAAV复制型腺相关病毒检测时，出现扩增曲线异常的可能原因是什么？①软件参数设置不当可能引起标曲参数或检测结果异常。如扩增曲线信号蕞早出现在14个循环左右，基线却设置为3-15，导致仪器将14个循环出现的荧光信号默认为基线部分，出现结果异常。建议将BaselineEnd设置为扩增信...

核酸提取时，加标回收率的定义及注意事项：加标回收率是指在测定样品的同时,于同一样品的子样中加入一定量的标准物质进行测定,将其测定结果扣除样品的测定值,以计算回收率。加标回收设置的注意事项：①同一样品的子样取样体积必须相等;②各类子样的测定过程必须按相同的操作步骤进行。③加标量不能过大,一般为待测物含...

磁珠法核酸提取一般可以分为四步：裂解——结合——洗涤——洗脱洗涤：核酸的高电荷磷酸骨架使其比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性，根据它们理化性质的差异，用选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法可将核酸分离、纯化。用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中蕞常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任...

南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒利用Taqman荧光探针原理，定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成品中残留的Vero宿主细胞DNA，产品具备检测快速、操作简单、特异性强、检测灵敏度高、稳定性好、能防止PCR产物污染等特点。蕞低检测限可以达到fg级别...