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医学实验外包,circRNA Pulldown(环状RNA)介绍:使用生物素RNA探针,与细胞裂解液孵育,形成探针-circRNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与裂解液中的其他成分分离。磁珠复合物洗脱后,可通过western blot实验或质谱实验检测特定的circRNA结合蛋白是否与circRNA相互作用。RNA pull-down实验就是先将RNA进行标记(如生物素探针标记),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-蛋白质复合物,之后再分离复合物得到蛋白质,通过western blot 或mass Spectrometry检测蛋白质的技术。目前RNA pull-down技术已成为研究miRNA、lncRNA与相互作用蛋白的主要技术手段之一。
医学实验外包,对于很多实验室的老师来说,有些实验难度大,或者是缺乏相应的条件,把实验外包出去,这都是可以理解的。医学实验的一般研究思路,比如发现一个基因在某**细胞系中表达下调,下一步若做机制研究首先,确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调,可以通过westernblot和realtimeRT-PCR来初步确认一下。如果是mRNA水平上就出现下调,那么比较有可能的是这个基因是受这个***的某个信号通路或者是转录因子调控,从而影响它的转录。具体是哪条通路或者是哪几条通路就要多看看paper还有做实验来看了。如果是mRNA水平没有影响,只影响蛋白质水平,那么有可能是蛋白质翻译后修饰或者是蛋白质降解引起的,也是多看看分析一下有可能的降解或者是修饰的途径。另外你再查查有没有这个蛋白与其他蛋白的相互作用研究,可以大致预测是哪条通路。如果没有人做过你就发达了~~还有可以看看你研究的**中是否有发现类似的报道。有个病理上模型的支撑就更加好了。医学实验外包,造模经验丰富,操作熟练。
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