免疫组化的局限性，可能会有假阳性。阳性信号定位不正确即为假阳性，包括着色不匀、背景着色、边缘效应，另外组织的某些特定成分也能导致假阳性结果。假阳性可能的原因有:(1)一抗浓度及一抗是否失效，抗体有一个合适的浓度范围且必须在有效期内使用，过期的抗体或者不着色，或者背景着色，形成假阳性;(2)试剂未充分覆盖组织，组织边缘的试剂易干浓度较组织中间高致深染;(3)抗体孵育时间过长，由于室温的影响夏季孵育时间稍短，冬季孵育时间稍长;(4)操作过程中组织变干，造成组织边缘收缩或损坏形成伪影，产生假阳性;(5)3，3'-二氨基联苯胺(DAB)显色时间太长，DAB宜现配现用，配制时间比较好在30min以内;(6)由于胞浆里含有较多的蛋白质，因此间质和胞浆中出现很多非特异性的染色，如内源性酶血红蛋白、肌红蛋白等造成的着色，可以通过血清封闭解决;乳腺cancer组织中的脂肪细胞、淋巴细胞也会产生非特异性的染色;(7)非特异性抗体吸附常见于坏死组织中，使坏死组织呈较高的背景染色，在免疫组化中应避免选择坏死组织较多的蜡块。病理报告中的免疫组化到底有什么作用?江苏免疫组化外包
免疫组化的应用领域
免疫组化在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。在**学中，免疫组化通常被用于**标志物的检测，帮助确定**的类型、分级和预后。例如，免疫组化通过检测ER、PR和HER2的表达，可以指导乳腺*的治疗方案。在神经科学中，免疫组化用于研究神经元的分布和功能。在免疫学中，免疫组化可以用于检测炎症细胞和免疫细胞在组织中的分布和水平。此外，免疫组化实验技术还被广泛应用于发育生物学、病理学和药物研发等领域。 江苏免疫组化外包哪里可以做免疫组化？
细胞属性的判定，免疫组化也可以进行这方面的临床应用。通过特定抗体标记出细胞内相应的抗原成分，来判定细胞的属性，确定cancer的来源。如细胞角蛋白(CK)是上皮性标记，CK阳性提示cancer为上皮源性cancer;降钙素抗体是甲状腺髓样cancer特有的标记;甲状腺球蛋白(Tg)阳性提示是甲状腺滤泡性cancer;前列腺特异性抗原(PSA)只见于前列腺上皮;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性则提示胶质cancer;CD20和CD79a阳性则提示B细胞淋巴瘤;平滑肌肌动蛋白(Actin)阳性提示cancer为平滑肌源性;胃肠道间质瘤中原cancer基因蛋白产物CD117阳性;血管源性cancer中内皮细胞标记物CD34阳性等等。如果您需要做实验外包，可以与我们英瀚斯生物进行联系。
免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色？
（1）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。
（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。
（3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；
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（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；
（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等；
（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；
（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。 免疫组化的那些小知识，都在这里！
免疫组化结果背景染色较深的原因有哪些？
（1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。
（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，比较好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。
（3）DAB变质和显色时间太长：DAB比较好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色比较好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。但是当染**太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。
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免疫组化中IHC vs ICC的区别。英瀚斯生物为您说明。除了生物学来源，IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化，要么通过固定过程，要么是单独的透化步骤，这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤，这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理，才能进行抗体染色。一旦处理好样品，IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然，就染色而言，根据所使用的抗体来优化还是少不了的。江苏免疫组化外包
