与IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小时内完成,并且由于酶的特异性,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。该酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要还原条件或辅助因子即可发挥活性。活性是在37°C下,但也可以在室温下使用增加孵育时间进行消化。IgASAPSub1是从口腔链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为148kDa。IgASAPSub1冻干剂以冻干粉的形式提供,装在1000个单位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 18 kDa。云南GlySERIASIdeS蛋白酶

Genovis除了提供IdeS酶以外,还提供很多种特异性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1,产生完整的 Fab 和 Fc 片段的均质池。它在pH值和盐浓度范围内具有活性,不需要任何还原剂或辅助因子。因此,与许多其他常用的蛋白酶相比,FabALACTICA不需要任何优化来避免过度消化。这使得FabALACTICA成为一种有吸引力的酶,例如在还原和非还原条件下的LC-MS分析、抗体高阶结构(HOS)的结晶和NMR研究、双特异性或多特异性抗体的表征、单价结合研究和完整的Fc聚糖分析。安徽GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶获得完整Fab和Fc抗体片段,用于结晶和高阶结构 (HOS) 的 NMR 研究、结合研究等。

与IdeS不同,为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质,该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上,可以增加酶与蛋白质的比率,从而可以进一步加速反应,以获得更完整的连接子消化。此外,该酶不会存在于样品制备中,可能会干扰样品分析。为了进行比较,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜,或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性,使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖,并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明,GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子,留下了接近均质的Fc/2产物,其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化,两者都会产生几种 Fc 产物,并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外,在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充,Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子,有助于研究位于 GS 连接子的修饰。
为了让所有实验室都能同时快速自动消化多种抗体,Genovis的FabRICATORMagIC的设计具有灵活性,适用于一系列自动化平台。我们在ThermoScientific™KingFisher™纯化系统上优化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以转移到其他自动化平台,如果没有自动化,在振动台上也能同样出色地工作。消解后,将含有处理样品的深孔板直接转移到LC-MS的自动进样器中进行快速色谱分析,或转移到其他分析方法进行分析。FabRICATORMagIC与在消解缓冲液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以极大限度地减少自动化系统中可能发生的纯粹压力。使用KingFisher仪器处理样品时,样品制备非常简单。将样品、树脂和缓冲液移液到指定的孔或板中,然后将板放入仪器中。设计用于FabRICATORMagIC的BindIt™协议将控制每个步骤的孵育温度和时间。Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS蛋白酶)试剂盒可消化兔 IgG。

一些应用(如结合研究)具有高度灵敏度,因此在制备中需要不含残留酶的纯抗体片段。因此,Genovis的 IgG 特异性蛋白酶也以固定化酶提供,可快速轻松地生成均质 F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),用于制备来自多种 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(对于兔 IgG,请咨询),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 试剂盒进行处理 。 为了生成和纯化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒处理曲妥珠单抗,并通过 SDS-page 进行分析。首先,在室温下在FabRICATOR固定化离心柱上消化抗体15分钟,然后进行短离心步骤。在 CaptureSelect ™ 离心柱上纯化 F(ab')2 片段,并通过降低 pH 值,然后立即调整回中性 pH 值,一步洗脱结合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒从酶切到收集片段的过程大约需要 1 小时在抗体药及核酸药领域,倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程,抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。湖北IdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
FabRICATOR是从化脓性链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达,用于需要高标准和一致性的生物技术应用。云南GlySERIASIdeS蛋白酶
在Genovis,我们的策略是帮助客户进行中级(或亚基)分析,这是我们的工作,特别是我们的蛋白质酶切产品。完整质量和肽图谱是蛋白质表征的常用方法,我们发现,与简单但信息有限的完整质量和高度复杂但信息丰富的肽图谱相比,中级方法具有优势。通过执行中级描述,您可以生成从完整的质量实验中获得的所有信息,具有额外的优势。在对抗体进行完整质量分析时,很难明确地识别某些修饰。质谱仪器正在改进,可以更有效地分析更大的分子,但通过使用我们的SmartEnzymes,如IdeS,可以将抗体分解成更小的片段,这提高了这些实验可以执行的分辨率,因此,增加了鉴定修饰的信心。此外,你不仅能够更好地识别修改,而且你能够将它们定位到蛋白质上的单个结构域,这是你在完整水平上无法做到的。云南GlySERIASIdeS蛋白酶
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