肝脏是人体“的”代谢，与、、糖尿病等代谢性疾病密切相关。肝细胞在肝脏参与的各种代谢过程中发挥了主要作用。肝细胞是实质细胞，在肝脏中的比例多；此外实质细胞还包括少量的胆管内皮细胞。而非实质细胞则包括星状细胞，巨噬细胞，NK细胞，成纤维细胞等，只占整个肝脏细胞的20%左右。原代肝细胞的优点：①原代肝细胞由于离体时间短，因此其能够保持在体内的生物学特性，是更接近体内环境的研究模型。②原代肝细胞能够避免体内实验时肝脏其他细胞对肝细胞的影响，从而得出更加准确的研究结果。③原代细胞相比体内实验具有更好的可控性。 原代肝细胞厂家直供优势。欢迎来电咨询上海中乔新舟！安徽静脉内皮原代肝细胞培养技巧
原代肝细胞的分离与培养采用Seglen门静脉两步灌流法及其改良方法分离小鼠原代肝细胞，多次低速离心纯化肝实质细胞，采用单层胶原培养法进行体外培养[15-18]。具体操作：雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射1%钠(50mg/kg)麻醉后，浸泡于75%乙醇中消毒1～2min，在无菌条件下(超净工作台中)剪开腹部并暴露下腔静脉与肝门静脉。将静脉留置针插入下腔静脉后，迅速剪断肝门静脉。用无钙无镁的PBS缓冲液(含EDTA)灌流约50mL，在整个过程中，灌流液的灌流速度保持在7～8mL/min，温度保持在37℃左右。待肝脏血液排出，肝脏变白后，用IV型胶原酶缓冲液()进行原位消化，灌注胶原酶时，先用镊子夹闭肝门静脉，待肝脏膨起后停顿30s再松开镊子，反复多次，共灌流约10mL，温度保持在37℃左右。灌流结束后，迅速将肝脏从体腔中取出并转移到含EDTA的预冷PBS缓冲液中洗去血污、摘除胆囊，随后转移至含10%胎牛血清的DMEM培养基的培养皿中。用镊子轻轻地撕开包膜，夹住肝蒂轻轻晃动使肝细胞充分释放，收集肝细胞悬液，用200目细胞筛网过滤。滤液在4℃、500r/min低速离心3min，弃上清。细胞沉淀用4～5mL的PBS缓冲液重悬后在4℃、500r/min离心1min，重复清洗3次后，使用台盼蓝检测细胞活率和产出。 江西长白猪的原代肝细胞属于什么细胞原代肝细胞的选材要求是什么？上海中乔新舟告诉您。
结合国内外小鼠原代肝细胞分离培养的方法并加以改良，成功获得了产量高、活率高、纯度高的原代肝细胞，在此基础上采用不同浓度的FFA混合物(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导贴壁的原代肝细胞，成功构建了肝脂肪变性细胞模型，并且能够很好地模拟体内肝实质细胞脂质累积的现象。由于肝脂肪变性细胞模型还存在一定的局限性，如不能充分模拟肝脏局部微环境对NAFLD发病过程的影响，因此还需将细胞模型与动物模型相互联系起来，使两种模型相互补充，取长补短，为进一步研究NAFLD的发病机制及药物治疗奠定基础。
原代肝细胞分离、培养及SOP，一、实验动物：ICR，4-6W二、实验器材：手术剪、手术镊、玻璃皿、泵、注射器、一次性静脉输液器三、实验步骤：1、先注射，再注射，将小鼠麻醉，同时防止凝血。2、酒精消毒，用手术剪剪开小鼠皮肤，暴露腹腔，可见鲜红的肝脏，将肠挪到右侧，胰腺也挪到右侧，暴露出下方静脉血管（门静脉），再找到中间偏左腹腔静脉（下腔静脉）。3、右手取静脉注射针平插入门静脉远端，左手用镊子夹住针头及血管，防止其脱落，右手轻轻的松开，左手保持不动，启动泵，开始导入预热至37度的无钙灌流液（G2），待充盈立起来（有的肝不明显），右手持手术剪剪断下腔静脉，放流，使血液和灌流液流出。可观察到肝叶垂下来，然后右手持镊子夹住下腔静脉，停止放流。慢慢地，肝叶又充盈立起来，待肝叶完全立起来后，右手的镊子松开，放流，这个过程不断循环，一般需要灌50-60ml。可观察到肝叶逐渐肿胀变为淡黄色，肝叶立起来的现象渐渐不明显。4、待下腔静脉流出液接近无钙灌流液，用注射器吸取5-6ml胶原酶1稀释液（G3），接入灌肝装置，慢慢推入，尽量控制五分钟左右推完。整个期间，左手镊子一直夹住静脉插针和血管，不能松开而使静脉针脱落。。 原代肝细胞有什么特点？上海中乔新舟告诉您。
常见的肝细胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是来源于一个15岁白人的肝组织；Hepa1-6来源于小鼠肝，两者都属于永生细胞系，当然也有永生细胞系具有的通性缺点，如与正常肝脏细胞相比遗传物质发生改变，生物学特性会随着细胞分裂次数的增加而发生迁移等。原代细胞是指从机体获取组织细胞后的培养。由于离体时间短，因此其能够保持在体内的生物学特性，与细胞系相比，是更接近体内环境的研究模型。肝脏是作为机体“”的代谢，其组成是极其复杂的，除了肝细胞，还包含众多内皮细胞、免疫细胞等组分，各类细胞功能各异并相互交流，共同决定肝脏的代谢表型。因此，当我们要研究某一表型究竟是由于肝细胞自身的变化引起的，还是由其他细胞类型所介导的时，使用小鼠肝脏组织是无法说清问题的，使用原代肝细胞能够避免其他细胞的影响，从而得到更加准确地结论。原代细胞相对于体内实验，更加可控，可给予的实验干预也更多。 上海中乔新舟 原代肝细胞安心售后。欢迎来电咨询上海中乔新舟！安徽静脉内皮原代肝细胞培养技巧
选择原代肝细胞应该注意什么？上海中乔新舟告诉您。安徽静脉内皮原代肝细胞培养技巧
实验步骤1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，带线缝合针从下腔静脉下穿过，打一松松的假结，从假结下方的静脉插入静脉留置针，将假结系紧。注意：穿带线缝合针时不要扎破血管，打的结不要包进太多肉，否则结系不紧。静脉留置针如成功扎进血管，里面的针时会出现回血现象。2通过留置针注入肝素1ml后(快速推注)，准备给予灌流液1，同时剪开肝门静脉，灌注时间3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注时间很重要，两次灌注时严格保持针不要动，否则容易扎破血管）。翻开肝脏取出胆囊。4摘下肝脏放入置于冰上的平皿中，将肝脏转移至细胞间内，放于400目筛网上，用4度预冷的1640无血清培养液反复吹打肝脏，并用灭菌的镊子摔打（不要太用力），将肝细胞吹打下来，直至剩下肝包膜（注意肝脏不能摩擦筛网）。取20μl细胞液观察细胞活力。加入2μl台盼蓝染色（）染色涂片，混匀盖上玻璃片，显微镜下观察。5静置5min将细胞沉淀（将皿倾斜放置），用小心吸弃部分上清。6将沉淀的肝细胞转移到50ml离心管中，补齐无血清预冷1640至25ml。4度50g离心2分钟，一共离心三次，离心后弃上清。7用6ml含10%血清的1640培养液重悬细胞，铺细胞于培养皿中，因细胞沉降快,每次铺前都要吹打混匀。 安徽静脉内皮原代肝细胞培养技巧
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1、原代细胞：ScienCell（中国区正规一级代理）人源和动物源各种原代细胞。
2、培养基：原代细胞**低血清、无血清、无异源蛋白无动物成分培养基。
3、细胞培养试剂：胎牛血清、原代细胞转染试剂盒、细胞实验检测试剂盒、细胞生长因子、ELISA试剂盒、定量PCR芯片试剂盒、DNA/RNA及细胞裂解物等。
4、细胞系（株）：种类丰富（1000余种），已通过STR鉴定；提供细胞株完全培养基。
5、自研产品：支原体检测/qing除试剂盒、端粒酶检测试剂盒、人源/动物源ELISA试剂盒等系列产品。
6、技术服务：绿/红色荧光蛋白标记、荧光素酶标记、慢bing毒介导基因沉默或过表达及稳转株的构建，细菌基因敲除、细胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能学实验。
