PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程（1）将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中（也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基）。（2）在37℃培养细胞10～20分钟。（3）用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。（4）用535nm激发波长，615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事项：PI对人体有刺激性，请注意适当防护。Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。湖南荧光染料高分子
三、流式细胞仪分析1、取对数生长期的细胞，接种到孔板，过夜培养。2、如果要进行药物刺激，在细胞中加入感兴趣的药物进行干预，继续培养一定时间后，收集细胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重悬细胞，37℃避光孵育15min或更长时间。【注意】：由于细胞种类和实验体系不同，Rhodamine123工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。4、用流式细胞仪检测。
四、实验案例1、取对数生长期A549细胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培养基）,37℃培养箱培养4-24h待其贴壁，以便后续实验操作.2、弃掉培养液，PBS洗涤两次.3、用培养基（无血清）稀释Rh123母液制备1～20µMRh123工作液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。4、将Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分钟.5、去除Rh123工作液并用PBS洗涤三次细胞去除背景色.6、荧光显微镜观察. 湖南荧光染料高分子5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一种胺活性衍生物的荧光染料.
CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写，是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记，对于蛋白抗体的标记，可以通过简单的混合反应来完成结合，下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法，具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果，请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0，应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL，标记效率会**降低。为获得比较好标记效率，建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中，和铵离子，否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。
羰花青染料***用作Di来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。长链羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于标记膜和其他疏水结构。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它们在脂质环境中具有极高的消光系数、环境依赖性荧光和短的激发态寿命。它们在室温下是油状物，在水中发出微弱荧光，但当掺入膜中或与亲脂性生物分子结合时，它们发出高荧光且相当耐光。这些光学特性使它们成为细胞质膜染色的理想选择。一旦应用于细胞，这些染料就会在质膜内横向扩散，导致整个细胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈现出不同的绿色、橙色、红色和红外荧光，从而促进活细胞的多色成像和流式细胞术分析。DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiI及其类似物是**常用的，因为它们通常表现出非常低的细胞毒性。此外，DiI***用于测定LDL和HDL等脂蛋白。亲脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神经元示踪[2]。DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在小动物成像中用来示踪。
选择荧光染料时要考虑那些因素：激发波长处的消光系数应尽可能高：消光系数是衡量可以吸收多少光子的量度。量子产率应该尽可能高：这是吸收光子与发射光子的比率。消光系数和量子产率的乘积就是亮度。荧光染料应该是光稳定的：遗憾的是，比较不同公司染料的光稳定性的研究并不多。光致变色行为：对于STORM实验，您需要一个闪烁的荧光团。但是，对于分子跟踪实验，您***不想要闪烁的荧光团。活/死细胞渗透性。您想要的反应侧基（例如HaloTag、抗体等）。当您使用多个荧光探针时，尤其是当您量化共定位时，请谨慎处理其他颜色通道中的渗色。单独测试所有荧光探针以评估渗透。D-荧光素钾盐南京星叶生物科技有限公司。湖南荧光染料高分子
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D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外，荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。湖南荧光染料高分子
