浙江高效内毒素检测常见问题分析

低内毒素回收（LER）与传统鲎试剂干扰（抑制 / 增强）在多维度存在差异，准确区分对优化内毒素检测至关重要。表现上，LER 是内毒素回收率＜50%，传统干扰是反应抑制或增强；成因上，LER 由螯合剂 + 表面活性剂协同或蛋白质电荷结合引发，传统干扰因 pH、β- 葡聚糖等导致；排除方式上，LER 时间依赖且无法稀释解决，传统干扰浓度依赖且可通过稀释缓解；确认方法上，LER 需通过保存时间研究（HTS），传统干扰按药典干扰实验评估。明确这些区别能帮助企业排查内毒素检测异常，避免误将 LER 当作普通干扰处理。

随着生物制药行业的快速发展，注射用药剂、疫苗等制剂及植入性医疗器械的生产需求激增，直接推动了内毒素检测试剂的市场需求。然而，传统内毒素检测严重依赖天然鲎试剂，而全球鲎资源正面临衰减危机。2021 年 2 月，我国国家林业和草原局、农业农村部联合公告将鲎科动物列为国家二级保护动物，严格限制捕捞配额，导致天然鲎试剂价格持续上涨，甚至出现关键检测环节的供应短缺问题。在此背景下，湖州申科研发的重组级联试剂（rCR）通过基因工程技术实现无动物源性生产，彻底摆脱对鲎血资源的依赖。该试剂支持 “减少、替代、优化” 的 3R 动物保护原则，不仅解决了资源受限的行业痛点，还能保障长期稳定供应，为内毒素检测领域的可持续发展提供了理想解决方案。

内毒素检测常与热原检测混淆，二者既有关联又有区别：热原是指所有能引起发热的物质（包括内毒素、病毒、真菌等），通过传统家兔热原试验检测；内毒素是热原的主要成分（占 90% 以上），检测更具特异性。目前，家兔热原试验因操作复杂、动物成本高，已逐渐被单核细胞活化反应测定法（MAT）替代，但部分产品（如放射性质药物、血液制品）仍需保留家兔试验作为补充。法规要求内毒素检测结果需与热原风险关联，若内毒素检测合格但临床出现热原反应，需排查是否存在非内毒素类热原，通过联合检测确保产品安全性。

内毒素检测重组级联试剂（rCR）在方法桥接方面具有明显优势，可大幅度降低实验室的转换成本。在设备兼容性上，rCR 无需额外采购新设备，完全适配天然鲎动态显色法现用的酶标仪（如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌），支持 405nm 波长动态读数和 37℃恒温孵育。操作流程上，rCR 的样品处理、试剂混合、加样孵育等步骤与天然鲎试剂一致，实验室无需重新培训操作人员或修改 SOP。显色系统方面，rCR 沿用与天然试剂相同的 PNA 显色底物，通过黄色信号变化定量，检测原理和数据分析方法保持不变。这种高度兼容性使实验室能快速完成方法验证和切换，加速重组试剂的合规应用进程。

细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜释放的脂多糖（LPS）成分，具有极强的生物活性，微量即可引发人体发热、休克甚至多脏器功能衰竭。因此，在生物制品、医疗器械、制药用水等领域，细菌内毒素检测是保障产品安全性的关键质控环节。其检测原理基于内毒素与特定试剂的特异性反应：内毒素可活化鲎血变形细胞裂解物（LAL）中的凝血级联反应，通过C因子通路触发酶促反应，通过观察凝胶形成、浊度变化或显色强度实现定量或定性分析。目前，各国药典均将内毒素检测列为强制要求，以降低临床应用中的热原风险。

样品中的高渗透性成分（如高浓度盐、糖）会通过改变反应体系渗透压，抑制鲎试剂反应，影响内毒素检测结果。例如，浓度为 70% 的葡萄糖溶液、高浓度氯化钠溶液等，会形成高渗透压环境，导致鲎试剂中的蛋白质脱水变性，丧失酶活性，进而使内毒素无法被正常检测，出现假阴性。这类高渗透性基质的干扰机制明确 —— 通过破坏蛋白质结构影响酶促反应，且干扰程度与浓度正相关。为消除这类干扰，解决方案是使用内毒素检查用水稀释样品：根据样品渗透性高低，逐步稀释至适宜浓度（通常需稀释至渗透压与生理盐水接近），降低对蛋白质的脱水作用，恢复鲎试剂中酶的活性。稀释过程中需注意，稀释倍数需在方法验证确定的 “无干扰稀释范围” 内，避免因过度稀释导致内毒素浓度低于检测限，确保内毒素检测既能规避高渗透性抑制，又能准确捕捉微量内毒素。