重组蛋白热原检测法规要求

PyroSHENTEK^®热原检测试剂盒以 “简化流程、提升效率” 为设计理念，采用即用型细胞，冻存细胞无需离心复苏培养，复融后可直接与供试品混合共孵育，大幅节省传统细胞预处理（如调整细胞状态、铺板培养）的时间成本。实验流程清晰可控：只需按要求制备待测供试品与内毒素工作标准品，各取对应体积加入细胞悬液（每孔加样量明确），经 37℃、5% CO₂孵育 24 小时后，离心收集上清并通过 ELISA 法检测 IL-6 含量，全程可在 24 小时内获得稳定可靠的检测结果。这种便捷性尤其适配实验室高通量检测需求，减少人员操作步骤的同时，降低了因复杂操作引入的误差风险，兼顾效率与准确性。

湖州申科生物热原检测（MAT法） 试剂盒在灵敏度、稳定性与适用性上表现突出，关键性能参数符合药典要求：标曲线性范围 0.0125-1.0EU/mL，相关系数 R²≥0.98，定量限 0.025EU/mL，检测限（LOD）0.0125EU/mL，批间精密度 CV≤25%，可准确捕捉微量热原。其优势在于特定的单核细胞系 —— 与依赖供体血液的 PBMC 细胞不同，申科 MAT 细胞系来源清晰可溯源，无需伦理审批与血站合作，规避供体差异导致的检测波动。对比同类型产品（如国外厂家 PBMC 细胞），申科细胞系的标曲各浓度点 CV 更低（ 低至3.6%）、相对偏差更小（ 12.31%），线性 R² 达 1.000，稳定性更优。此外，细胞冻存液组分经优化，复苏后活率高，无需额外调整细胞状态即可直接与供试品共孵育，操作便捷；且适配任何具备 450nm 波长的酶标仪，无需专门的设备，降低实验室投入成本。

欧盟在热原检测方法选择上，以动物保护和检测准确性为导向，形成明确的法规倾向。首先，欧盟禁止家兔法（PRT 法）这类动物实验，要求采用替代方法，单核细胞活化试验（MAT 法）因符合 3R 原则（替代、减少、优化），被纳入欧洲药典（EP2.6.30），成为热原检测的主流替代方法。其次，对于鲎试剂法，欧盟虽未禁止（因其属于鲎血提取而非动物实验），但出于鲎资源保护考量，推荐使用重组 C 因子法（EP2.6.32），该方法无需依赖鲎血，通过基因工程技术制备试剂，避免资源衰减与生态争议。此外，美国药典（USP）和日本药典（JP）也同步推荐重组试剂（含重组级联试剂 rCR），形成国际法规协同趋势。需注意的是，欧盟对热原检测的要求是 “重点全场景覆盖致热物质”，MAT 法因能同时检测内毒素与非内毒素热原，重组 C 因子法因特异性高（无 G 因子干扰），均符合其法规逻辑，而传统鲎试剂法需额外关注 β- 葡聚糖假阳性问题，复杂基质样品需加做干扰验证。

在 MAT 热原检测中，单核细胞系与 PBMC（外周血单个核细胞）的检测结果稳定性差异明显。实验结果数据显示，单核细胞系的标曲 R² 达 1.000，各浓度点 CV 值极低（如 ST1 为 0.92%、ST2 为 1.5%），相对偏差均在 5% 以内；而 PBMC 的标曲 R² 为 0.997，部分浓度点 CV 值超 20%（如 ST2 为 39.6%、ST6 为 45.5%），相对偏差高达 171.43%。这种差异源于两者对热原反应的一致性—单核细胞系能稳定释放 IL-6，PBMC 则因供体差异导致 IL-6 释放水平波动，直接影响热原检测结果的重复性，单核细胞系更适配准确的热原定量需求。

单核细胞系培养的高度可控性，为热原检测结果的可靠性提供关键保障。其培养基配方（如营养成分、血清浓度）可定制，确保细胞获取充足营养；培养环境（37℃、5% CO₂、湿度≥90%）可恒定控制，维持细胞好的活性与 TLR 受体表达水平，避免因环境波动导致细胞功能异常。这种可控性还能防止细胞遗传突变与外源污染（如支原体、病毒），确保不同批次单核细胞系的热原响应一致性，让热原检测结果批间差异小，符合 GMP 对检测方法稳定性的要求。