根据FDA2006年发布的关于RCR复制型逆转录病毒检测的指南和2018年新更新的检测指南征求意见稿,目前RCR复制型逆转录病毒/RCL复制型慢病毒检测的金标准是共培养法,即将测试样品(病毒载体上清液、生产终末细胞、体外转导细胞等)与允许细胞系进行共培养,至少5次传代以扩增任何潜在的RCR复制型逆转录病毒/RCL复制型慢病毒,然后在指示阶段,通过检测特异性核酸、蛋白的方法进行测定,qPCR/RT-PCR法具备操作便捷快速、特异性好、灵敏度高、稳定性好等优点,是RCR/RCL检测的优 选方法。复制型逆转录病毒检测方法有哪些?重组腺相关病毒检测操作流程
美国FDA要求对于采用γ-逆转录病毒载体和慢病毒载体的产品,需要在整个生产过程及不同阶段进行RCR复制型逆转录病毒/RCL复制型慢病毒检测,针对载体生产用主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、载体上清液及在体外培养超过4天的载体转到细胞进行检测。针对慢病毒载体使用时RCL的检测,除了金标准——指示细胞培养法,还需要选择2种不同原理的快检方法对其进行补充检测。RT-PCR法具备操作便捷快速、特异性好、灵敏度高、稳定性好等优点,是RCR/RCL补充检测的优 选方法。上海复制型病毒检测常见问题为什么要做复制型病毒检测?
南京正扬生物科技有限公司自主研发生产的RCL复制型慢病毒/RCR复制型逆转录病毒检测试剂盒的特点:①检测试剂盒采用qRT-PCR原理,操作便捷,2-3小时可出结果。②试剂盒检测体系经过精心研发,可以阻止气溶胶污染物在下一次的检测反应中产生扩增,可以蕞大程度的减少检测过程中污染情况的发生。③RCL和RCR病毒检测方法成熟,试剂盒性能稳定,检测灵敏度高,可以快速准确的获得供试品中靶向基因的含量,帮助研究者进行分析。欢迎联系!
rcAAV复制型腺相关病毒检测过程中,标准品稀释环节有哪些注意事项?①用来做稀释的耗材建议使用1.5mL离心管,容量太大的耗材会增加DNA的吸附作用,容量太小易导致混匀不充分。②为了做出更好的线性,进行倍数稀释的时候要吸取较大体积标准品溶液(避免用1μL标准品+9μL稀释液这样的小体积体系进行稀释)。③每进行一步稀释都要进行充分的混匀,在点样前也要进行混匀。④为了提高准确性,每个浓度建议做3个复孔。欢迎联系南京正扬!重组腺相关病毒检测。
采用何种方法进行RCR/RCL病毒检测?复制型病毒(RCR/RCL)是γ-逆转录病毒载体与慢病毒载体的一个安全性质量控制项目,因病毒载体设计的不同,产生复制型病毒的风险也会有不同,如采用四质粒共转体系以及含有末端自我失活(SelfInactivating,SIN)结构的病毒载体,其病毒载体生产过程中产生RCL的风险会明显降低,但尽管如此,产生RCR/RCL的风险仍不能完全排除,因此仍需要对病毒载体进行RCR/RCL的检测,且病毒载体不得检出RCR/RCL。qPCR法复制型慢病毒检测的优点有哪些?合肥病毒检测公司
复制型腺相关病毒检测方法有哪些?重组腺相关病毒检测操作流程
RCL复制型慢病毒检测方法包括以下3种:①ELISA法(p24蛋白测定):适用于由载体生产过程中病毒基因组之间的重组形成RCL的检测。但,对于VSV-G包膜质粒和来源于其他病毒的gal-pol基因功能组件之间发生重组不表达p24蛋白的假型病毒不适用。其优点为适用性广(浓缩载体、终末细胞、血清血浆等多种样本)、灵敏度高和可定量等。②使用qPCR的方法测定VSV-G基因和PCR方法检测由病毒载体质粒和包装质粒重组产生的psi-gag基因序列,具有灵敏度高,可重复性和操作简单等优点。③测定逆转录酶活性的方法,它可以用来检测RCL相关的不同结构的逆转病毒,缺点为在某些细胞检测中,存在背景高的现象。重组腺相关病毒检测操作流程
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