重庆褐藻寡糖提取方法

植物在生长发育的过程中会遭受多种病害的胁迫,造成产量和品质下降。植物免疫诱抗剂又称“植物疫苗”,可以通过诱导植物自身的免疫系统激发防御应答反应,增强植物抗病性;且能减少化学农药的使用,降低对人和环境的危害。寡糖类诱抗剂是一类具有生物调节功能的碳水化合物,能在较低的浓度下被植物细胞表面的免疫识别受体所识别进而激发PTI,诱导植物产生一系列的免疫应答,增强植物的抗病能力。前期,我们利用褐藻胶裂解酶Aly2降解褐藻胶得到褐藻胶寡糖。在此基础上,以本氏烟和拟南芥为供试植物,以马铃薯X病毒、烟C花叶病毒和致病疫霉为防治对象,对AOS在诱导植物抵抗病害过程中发挥的作用及其分子机制进行研究。褐藻寡糖能够作为信号调节分子作用于植物，促进植物的生长，此研究为海洋活性寡糖的开发开辟了新的途径。重庆褐藻寡糖提取方法

研究了在浸麦阶段添加褐藻胶寡糖对大麦发芽力和发芽率、大麦发芽过程中水解酶活力及麦芽质量的影响。结果表明，添加５０ｍｇ／Ｌ褐藻胶寡糖时大麦发芽力和发芽率比对照组分别提高了４６．４％和１２．０％。褐藻胶寡糖能够显著提高大麦发芽过程中α－淀粉酶、β－淀粉酶、蛋白酶和β－葡聚糖酶活力。发芽结束时，添加５０ｍｇ／Ｌ褐藻胶寡糖的α－淀粉酶、β－淀粉酶、蛋白酶和β－葡聚糖酶活力比对照组分别提高了４３．５％、２２．９％、２０．６％和２０．５％。褐藻胶寡糖还能提高麦芽质量，与对照组相比，添加５０ｍｇ／Ｌ褐藻胶寡糖时麦芽的脆度、浸出物质量分数、α－氨基氮质量分数、库尔巴哈值和糖化力分别提高了６．１％、８．０％、２１．２％、７．３％和８．６％，麦芽的β－葡聚糖质量分数和黏度分别降低了２９．２％和１５．４％。江苏褐藻寡糖成分鉴定褐藻寡糖可以通过SA信号途径促进NPR1和PR1蛋白基因的表达，使植株获得系统性抗性，增强对病毒的抵抗能力。

AOS增强植株对致病疫霉的抗性用100μg/mLAOS分别喷施拟南芥和本氏烟,24h后,接种致病疫霉。结果显示与喷施ddH2O的植株相比,AOS处理的叶片接种部位的水渍及叶片的黄化程度明显降低,检测致病疫霉菌丝的生长量也明显低于对照,表明AOS也可以增强植株对致病疫霉的抗性。AOS诱导植物早期免疫应答反应对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行相关免疫反应的检测。结果显示,在气孔开度方面,与ddH2O处理的对照组相比,AOS处理的本氏烟叶片的气孔开度明显较低,表明AOS通过调节叶片表面气孔的开合抑制病原菌的入侵。分别于2h、4h、8h、24h和48h时,对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行DAB和NBT组织化学染色,发现喷施ddH2O的叶片染色程度较浅,而喷施AOS的叶片染色程度较深,且在24h时染色深。qRT-PCR检测ROS合成基因RbohA、RbohB以及去除基因SOD、APX和CAT表达水平,显示RbohB基因表达量明显上调,CAT基因表达量明显下降,说明AOS可以通过抑制CAT基因和促进RbohB基因的表达,提高过氧化氢的积累。

糖类物质按照分子聚合度的大小可以分为单糖、寡糖和多糖。由一个分子构 成的糖称为单糖，一般来说2~20个分子构成的短链糖苷称为寡糖或者低聚糖，100 个以上的称为多糖。寡糖可以由多糖通过 酶解、酸水解和氧化降解等方法而获得，制取比较方便，来源也非常普遍，结构 和功能也各不相同，在应用中无毒无污染，在环境中可以自行降解，已经证明， 寡糖具有多种生物活性，能够调节植物的生长，诱导植物抗逆性的产生，目前， 寡糖类诱抗剂的研究已成为植物诱抗剂研究的热点。寡糖主要的构成单元为五碳糖和六碳糖，其中以六碳糖居多。即葡萄糖、半 乳糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖等。有这些单糖经过聚合以直链或者支链 的形式形成多种结构和功能各异的多糖。据报道，目前已经确定的寡糖已有上千 种。动植物的结构多糖具有非常复杂的结构，在合适的条件下又可以进行降解， 产生许多结构不同、大小不一的寡糖片段，具有多种功能活性，Albersheim 等（1985）将这些具有多种生物活性的寡糖被统称为寡糖素。褐藻寡糖能促进过氧化氢的积累且在24h左右诱导植物体内活性氧的爆发。

利用高效安全无污染的生物制剂褐藻寡糖外源喷施黄瓜幼苗,将黄瓜幼苗分为喷施组和未喷施组;再配制不同浓度（0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、）的褐藻寡糖溶液喷施黄瓜幼苗。对黄瓜幼苗的生长指标,抗氧化酶活性及抗氧化酶相关基因、WRKY基因家族对褐藻寡糖应答情况进行测定。旨在探究不同浓度褐藻寡糖对黄瓜的生长、产量及品质的影响,对褐藻寡糖对作物促进作用的机理进行了初步研究,探索WRKY转录因子和褐藻寡糖在黄瓜生长中的重要功能及作用机制。结果如下:褐藻寡糖促进黄瓜幼苗生长发育,主要表现为生物量（株高、茎粗）随着浓度的升高呈增长趋势,叶片数增多。与未喷施组相比,喷施组生物量均有所改善。对果期产量也有所提高。褐藻寡糖喷施后,果期的品质均有所提高。其中维生素C含量0.1%浓度处理升高明显,是未喷施组的1.34倍。可溶性蛋白含量0.5%浓度处理效果好是未喷施组的1.59倍。可溶性糖含量浓度为0.2%、0.3%效果好,两组均是未喷施组的1.39倍。根据糖酸比分析,几组处理0.2%、0.3%效果好。褐藻胶寡糖在调控植物生理活动中有重要作用，如参与根的生长、非生物胁迫（干旱和盐碱）以及植物的免疫等。重庆褐藻寡糖提取方法

寡糖作为信号分子与作物细胞结合并相互作用，引起作物的相关信号转导。重庆褐藻寡糖提取方法

    美国复杂碳水化合物研究中心的主任Albersheim等提出了寡糖素这个概念，他认为低浓度的寡糖是一种信号分子，可以与作物相互作用，对作物的生长、发育和繁殖等起调控作用，抵Z病原微生物的侵染通过在调节过程中积累抗病物质。褐藻寡糖是从植物和病菌中提取的低聚糖，对植物种子萌发、根系生长和枝条伸长有促进作用，来源也非常普遍，开发应用的潜在可能性大，可以改善现阶段设施内作物生产过程中化肥等的过度使用给人类和环境带来的巨大危害。植物生长表现为，植物细胞体积的增加、植物细胞分裂以及组织特性的发育过程。细胞分裂过程中的动力和扩张的分子机制主要依赖糖类等碳水化合物来提供能量。糖信号是决定植物生长发育的中心，与其他信号网络连接，控制细胞增殖和扩张。植物的生长发育还依赖于蛋白质的合成，而糖和环境信号对mRNA翻译的调控至关重要。 重庆褐藻寡糖提取方法

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