内蒙古褐藻寡糖提取方法

前寡糖在植物促生长与诱导抗逆领域研究的现状，本研究选择不同来 源、不同分子量大小的褐藻寡糖、果胶寡糖和壳寡糖的寡糖片段，通过促生长与 抗逆作用对其生物活性进行比对筛选。以促进植物种子萌发和幼苗生长作为寡糖 片段的促生长指标，以大豆子叶法测定诱导产生植保素的合成作为寡糖片段的抗 逆指标，对寡糖种类、分子量水平和浓度大小与促生长和抗逆效应的影响进行研 究，以获得具有优良的促生长与抗逆性能的寡糖片段。褐藻寡糖 HZ3 在浓度为 0.1%时对豌豆促生长效果为明显，能够明显的促进豌 豆根和芽的生长，增加根和芽的干重。褐藻寡糖参与植物代谢过程，并作为营养和代谢物信号分子，唤醒特定的酶调节通路，调节相关基因的表达。内蒙古褐藻寡糖提取方法

    褐藻寡糖不仅可促进植物的生长，而且可提高植物对病害的抵抗力(Otterleietal.,1991)。王松(2003)利用沸水煮提的方法从海带中得到褐藻酸钠后，然后再经过酸解和海螺酶降解得到聚合度为8-20的褐藻寡糖。将此褐藻寡糖应用于抗花叶病毒的研究。发现在处理4d后抗性开始提高，第6d时诱导抗病性达到高，并且以浓度为1000μg/ml的褐藻寡糖的诱导效果好。由于植物诱导抗逆领域关于褐藻寡糖的研究较少，因此开发褐藻寡糖在植物诱导抗逆领域中的应用，对于丰富褐藻寡糖的生物功能，开发具有诱导抗逆活性的褐藻寡糖片段，对增强植物对环境的适应能力，提高作物产量和品质具有十分重要的意义。海洋活性寡糖的开发与利用已成为利用海洋资源进行高值化开发的关键技术之一。对海洋的特殊环境适应，使多种海洋生物具有独特的多糖组成，利用多种手段对海洋多糖进行降解，可以获得种类繁多，结构各异的寡糖片段，由于其结构和组成的差异，寡糖片段内携带大量不同的信息，具有不同的功能活性。尤其是寡糖还可以作为诱抗剂能够诱导植物产生抗逆性能，此外寡糖还能够调节植物的生长发育，因此海洋寡糖由于其独特的组成和生物活性，已成为目前植物生长调节与诱导抗逆研究的热点。 山西褐藻寡糖g段褐藻寡糖能够改变草莓的呼吸过程，减少水分散失，降低外界对其造成的损伤。

选择三种来源（褐藻胶、果胶、壳聚糖）的不同分子量大小的九种寡糖片段进行研究。利用植物的促生长和抗逆指标进行筛选，获得了一种既具 有明显的促生长作用，又具有抗逆作用的寡糖片段，为褐藻寡糖 HZ3，经过质谱分析，其组分是以二、三糖为主的含有少量四糖和五糖的寡糖混合物。本研究第二部分是利用植物的植株、愈伤组织和悬浮细胞为材料，建立起寡糖促生长的综合性的验证方法。对植株分别选择了双子叶植物豌豆和单子叶植物玉米，利用寡糖浸种，分别考察在种子萌发与幼苗生长初期其体内蛋白酶、淀粉酶和激S含量的变化，结合种子与植株的生长指标，探讨寡糖的促生长作用机理。

褐藻寡糖喷施后黄瓜叶片CAT活性显著提高（p＜0.05）,0.2%处理是未喷施组的1.40倍,果期0.2%处理是未喷施组的5.03倍。叶片POD活性被激发,0.2%处理是未喷施组的1.01倍,SOD活性没有显著提高。果实CAT、POD、SOD、APX、GR活性均有所增高,0.2%处理较CK增幅大。褐藻寡糖喷施后,黄瓜果实的抗氧化酶G-POD4基因表达水平上升,T2组是CK组的1.19倍。喷施组SOD1基因表达水平均升高,其中T3组较CK组升高了5.06倍,效果明显。褐藻寡糖喷施后,分别检测叶片和根中WRKY家族转录因子的表达变化。在黄瓜叶片中,第Ⅰ类WRKY家族基因,WRKY2、WRKY4、WRKY23、WRKY39响应褐藻寡糖表达上调,第Ⅱ类WRKY家族基因有15个基因响应褐藻寡糖表达上调,第Ⅲ类WRKY家族基因基因中WRKY20、WRKY22、WRKY34、WRKY35在12h或24h出现表达上调的峰值。在黄瓜根中,第Ⅰ类WRKY家族基因,WRKY2、WRKY23、WRKY39响应褐藻寡糖表达上调,第Ⅱ类基因中有14个基因响应褐藻寡糖表达上调,第Ⅲ类WRKY家族基因有6个基因响应褐藻寡糖表达上调。褐藻寡糖能够与植物的细胞壁进行结合，又可以穿过细胞壁进入细胞内部与细胞膜进行结合。

    对初步纯化的褐藻胶裂解酶进行了酶学性质研究,酶的适反应条件为50℃、pH8,在4～40℃、pH6～8范围内酶活力较稳定;Ca2+、Mg2+和Fe2+等离子对该酶有促进作用,EDTA、Ba2+、Zn2+等有抑制作用。通过优化获得褐藻胶的好酶解条件,在底物浓度、加酶量、体系、45℃条件下反应32h时,还原糖生成量为。以提取的褐藻多糖为原材料,按照此酶解工艺大量制备褐藻寡糖,通过Bio-GelP2凝胶色谱柱分离纯化,得到不同聚合度的7个寡糖组分F1-F7,TLC分析结果显示,其聚合度在1-7之间。去除自由基结果表明,褐藻多糖和寡糖都具有较强的抗氧化活性。自由基去除率随着糖浓度的增加而增强,在寡糖浓度、多糖浓度±±。多糖、寡糖浓度为±±。在相对湿度为85%和62%的环境下,褐藻多糖和褐藻寡糖都表现出较强的吸湿能力,褐藻寡糖更佳。在干燥环境下,褐藻多糖和寡糖都表现出很强的保湿效果,36h时褐藻寡糖的保湿率达到。抑菌结果显示,褐藻寡糖对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均具有较好的抑菌作用,褐藻多糖对白色念珠菌具有抑菌效果,对另3种细菌无抑制。 褐藻寡糖可以诱导植物气孔关闭，有效抑制病原菌侵染宿主。河北褐藻寡糖提取方法

褐藻寡糖能促进过氧化氢的积累且在24h左右诱导植物体内活性氧的爆发。内蒙古褐藻寡糖提取方法

低温逆境时，寡糖处理能迅速增强其抗逆酶类，对引起细胞损伤的物质进行去除，提高植物的抗逆能力。干旱逆境，通过寡糖作用，能够使其体内的抗旱指标明显增强，如ABA的含量升高明显，对干旱下植株的生长状态进行调控，降低干旱胁迫对植株的损伤，达到诱导抗旱的目的。抗病性能的提高，通过检测烟C花叶病毒和病对植株的致病作用。对烟C花叶病毒，通过将寡糖作用于病毒与植株的侵染过程、体内复制阶段进行诱导抗病毒研究，发现褐藻寡糖可以明显提高植株的抗病毒能力，同时还能直接作用于病毒，在体外对其进行钝化，降低传染几率，达到抗病毒的效果。体外和体内两条途径对病菌进行抗病能力的检测，发现褐藻寡糖不能抑制病菌的生长，而是通过提高植株的体内抗逆酶类，达到抗病的效果，其对烟C病的比较好防效为4d，比三唑酮的比较好防效减少了2d，缩短了病的治好时间，降低了烟C的损伤。对植物果实的抗病保鲜的研究，发现褐藻寡糖能够改变草莓的呼吸过程，减少水分散失，降低外界对其造成的损伤。因此褐藻寡糖对植物的抗逆机制是通过诱导作用实现的。诱导植物体内产生各种抗性物质来缓解逆境因素对植物造成的损伤，从而达到抗逆的目的。内蒙古褐藻寡糖提取方法

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