免疫组化有哪几种分类 ? 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。 英瀚斯生物病理染色效果好,效率高。 3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用...
确定cancer分期,免疫组化技术应用于临床可以进行处理哦,英瀚斯生物为您处理。cancer分期是判断预后的一个指标,与是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭密切相关,而通过免疫组化方法可以判断cancer是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭。层黏连蛋白和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可以清楚的显示基膜的主要成分,用于区分原位*和浸润*,一旦上皮性*突破基膜为浸润,未突破基膜为原位;显示血管和淋巴管内皮细胞的标记物第八因子相关蛋白、D2-40等则可清楚显示cancer对血管或淋巴管的浸润。因此对许多cancer的良恶性鉴别及有无血管或淋巴管浸润,免疫组化结果作为主要的鉴别依据。免疫组化失败的原因?河南组织免疫组化要多...
免疫组化有哪几种分类 ? 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。 英瀚斯生物病理染色效果好,效率高。 3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用...
免疫组化技术应用于临床cancer良恶性的判断,英瀚斯生物为您介绍。对于反应性增生还是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。在滤泡反应性增生时,滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2阴性;而在滤泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性滤泡细胞有bcl-2的高表达,bcl-2阳性。而增殖细胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通过对cancer细胞增生的程度作出评价,从而提示增生细胞的良恶性。做免疫组化的目的是什么?新疆切片免疫组化 细胞爬片免疫组化检测实验步骤 1、选择贴壁...
免疫组化的特点: 1)特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。 2)敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。 3)定位准确、...
免疫组化临床应用中,可以对传染性疾病诊断。应用抗病毒、细菌、zhen菌和寄生虫抗原的特异性抗体进行免疫组化染色,可以检测和诊断许多传染性疾病病原微生物,如乙型肝炎病毒(HBV)、巨细胞病毒(CMV)、人乳T状瘤病毒(HPV)、疱疹病毒(HSV)、丙型肝炎病毒(HVC)、细小病毒B19、人禽流行性感冒病毒(AIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS)等等,由于免疫组化在传染性疾病诊断中具有及时性、低风险性、高敏感性、特异性、有效性等特点,可以用于(1)用于人类新病原微生物的识别;(2)提供快速的形态学诊断,使严重传染性疾病得以早期医疗;(3)在无法取得新鲜组织或尚无培养方法的情况下,提供诊断...
免疫组化应该选择石蜡切片还是冰冻切片? (1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是***我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。 (2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写着两者都可,那就都能做。 (3)石蜡切片的优点可以保持组织细...
免疫组化的局限性。灵敏度高、精确性和特异性是一种理想的cancer标记物必须具有的,但至今所发现的cancer标记物还没有能完全满足这些标准。某些正常细胞也分泌一些cancer标记物,因此cancer细胞学并不是单独产生一种标记物,即选用一组抗体比单一抗体更有利。在cancer诊断中评估免疫组化的局限性主要在抗体特异性和解释方面。在免疫组化操作中都必须有适当的阳性与阴性对照,作为技术完整性质量控制,如对照组被忽略或不理想时,免疫组化染色的结果要谨慎对待,免疫组化的正确结果不仅要依靠技术步骤上规范化操作,而且有赖于正确的解释,在报告免疫组化染色结果时不应孤立地解释,应考虑到诊断与鉴别诊断、所应用...
免疫组化结果要如何分析? (1)阳性着色细胞计数法。在40*光镜下,随机选择不重叠的10个视野,机器或人工计数阳性着色细胞,每组3~6张不同动物组织切片,然后进行组间比较即可。 (2)灰密度分析法。可以通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析,然后进行统计分析即可。 (3)评分法。用光学显微镜下对组织切片分别按染色程度(0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色)、阳性范围进行评分(1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),**终可以分数相加,再进行比较。对于以上这几种方法,各有利弊,请细心选择。...
免疫组化如何才能充分脱蜡? (1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短; (2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。 (3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的...
免疫组化应该选择石蜡切片还是冰冻切片? (1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是***我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。 (2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写着两者都可,那就都能做。 (3)石蜡切片的优点可以保持组织细...
免疫组化中免疫胶体金技术,英瀚斯生物小编为您说明介绍。免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。免疫组化protocol,详情请看英瀚斯生物官网。...
免疫组化的局限性,可能会有假阳性。阳性信号定位不正确即为假阳性,包括着色不匀、背景着色、边缘效应,另外组织的某些特定成分也能导致假阳性结果。假阳性可能的原因有:(1)一抗浓度及一抗是否失效,抗体有一个合适的浓度范围且必须在有效期内使用,过期的抗体或者不着色,或者背景着色,形成假阳性;(2)试剂未充分覆盖组织,组织边缘的试剂易干浓度较组织中间高致深染;(3)抗体孵育时间过长,由于室温的影响夏季孵育时间稍短,冬季孵育时间稍长;(4)操作过程中组织变干,造成组织边缘收缩或损坏形成伪影,产生假阳性;(5)3,3'-二氨基联苯胺(DAB)显色时间太长,DAB宜现配现用,配制时间比较好在30min以内;(...
实验失败常见问题分析有哪些: 为什么在显微镜下观察发现所有的切片都成阴性? 答:这种现象主要是由操作不当导致,可能的原因有:1.染色操作不当,致使染色失败;2.漏加一种抗体或者制备出的抗体没有活性;3.缓冲液中有叠氮化钠,抑制了酶的活性;4.复染或脱水剂使用不当等。建议逐一排查,找到原因后重新进行实验。 在显微镜下观察发现所有的切片都成阳性,这是为什么?答:与上一个问题类似,出现的原因也是试验操作存在问题,可能的原因有:1.切片在染色过程中抗体过浓,或者干片了;使用的呈色底物溶液已变色或呈色反应时间过长;3.抗体温育的时间过长等。 在显微镜下观察发现切片的背景很深,...
目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。 英瀚斯生物,专业免疫组化技术方案。 2)免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色...
免疫组化临床应用对“未分化”cancer的分类。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer细胞的起源特征不能分类,初步区分组织学类型用非特异性抗体,在其基础上再选用特异性抗体做进一步鉴定。如分化差的cancer可显示Vimentin或S-100蛋白,有时淋巴瘤可以表达上皮膜抗原,一些黑色素瘤表现出角蛋白,这同时也强调了在cancer诊断中应使用一组抗体而不是单个抗体。如果您有实验外包的需求,可以与我们南京英瀚斯生物进行联系,我们也有做免疫组化的服务!英瀚斯生物,可做免疫组化定量分析。湖北细胞免疫组化多少钱关于免疫组化,抗体和抗原之间的结...
免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性,无阳性信号,假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当,根据不同的抗原特点采用不同的修复方法,大多数抗体要求热修复,热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化,如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊,进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照,比较两者染色结果。若阳性对照有表达,表明试剂和染色体系及实验步骤均...
免疫组化如何才能充分脱蜡? (1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短; (2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。 (3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的...
免疫组化结果背景染色较深的原因有哪些? (1)抗体浓度过高:一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是,每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,既使是即用型的抗体也应如此,不能只简单的按说明书进行染色。 (2)抗体孵育时间过长或温度较高:解决办法是,严格执行操作规程,比较好随身佩带报时表或报时钟,及时提醒,避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法(Polymer)敏感性很高,要求一抗孵育的时间不是传统的1小时,而是30分钟,因此,要根据染色结果进行调整。 (3)DAB变质和显色时间太长:DAB比较好现用现配,如有沉...
免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原(如蛋白)。immuno的词根来自操作中所使用的抗体,而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,简称ICC)。这两个词大家经常混着用,看着好像差不多,但实际上还是有点区别。IHCvsICC对于IHC,组织是来自患者或动物,经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片,封片后再处理。通过这种方法,研究人员可观察细胞组分的定位,同时维持周围组织的原先结构。对于ICC,大部分细胞外基质及其他基质组分被去除,只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液,来自患者或动物(如...
免疫组化实验所用的组织和细胞标本是什么样的? 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本**常用、**基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中优先的组织标本制作方法。 英瀚斯生物具有专业病理团队,染色分析一站搞定! 做免疫组化意味什么?青海做得好的免疫组化哪家好确定cancer分期,免疫组化技术应用于临床可以进行处理哦,英瀚斯生物为您...
目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。 英瀚斯生物,专业免疫组化技术方案。 2)免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色...
目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。 英瀚斯生物,专业免疫组化技术方案。 2)免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色...
目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。 英瀚斯生物,专业免疫组化技术方案。 2)免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色...
免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些? 1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果,抗原抗体反应有前带和后带效应,必须摸索比较好浓度。 2、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验,这是比较好的时间和次数。若不行,还可高压修复。 3、组织切片本身这种抗原含量低。 4、血清封闭时间过长。 5、DAB孵育时间过短。 6、细胞通透不全,抗体未能充分进入胞内参与反应。 7、开始做免疫组化,建议一定要首先做个阳性对照片,排除抗体等问...
免疫组化技术应用于临床cancer良恶性的判断,英瀚斯生物为您介绍。对于反应性增生还是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。在滤泡反应性增生时,滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2阴性;而在滤泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性滤泡细胞有bcl-2的高表达,bcl-2阳性。而增殖细胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通过对cancer细胞增生的程度作出评价,从而提示增生细胞的良恶性。免疫组化相关知识汇总。云南什么是免疫组化注意事项 免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复,抗...
免疫组化分类中免疫酶标方法,英瀚斯生物为您介绍。免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,目前在病理诊断中广为使用的当属***法(过氧化物酶-抗过氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物)、SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)、即用型二步法(聚合物链接)等。英瀚斯生...
免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复,抗原修复的条件是什么? (1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。 (2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高pH的等)。 (3)微波修复,我们一般用6min*4次,效果不错。 关于免疫组化的更多问题详解,关注英瀚斯生物。 关于免疫组化的常见问题汇总。江西细胞免疫组化可以做什么确定来源不明的转移瘤的原发部位,临床上免疫组化...
免疫组化的特点: 1)特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。 2)敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。 3)定位准确、...
免疫组化的局限性:在病理诊断中,随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现,免疫组化在病理诊断和医疗中已有了很重要的位置,对于cancer诊断、鉴别诊断、分类及诸多方面产生了重大的影响。但是免疫组化技术还存在着缺陷和不足,作为病理医生和病理技术人员不仅要充分认识到缺陷和不足,而且要努力避免由于缺陷和不足给诊断带来的误区,这就要求病理医生和病理技术人员在工作中不断学习与研究,在实际操作中总结经验教训,分析失败原因,努力实现操作规范化、标准化,才能充分发挥免疫组化在病理诊断及鉴别诊断、临床医疗中的指导作用。免疫组化IHC详细介绍!陕西小鼠免疫组化外包细胞属性的判定,免疫组化也可以进行...
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