关于BD Rhapsody单细胞平台的样本类型和样本制备 :在上机前需要注意细胞消化后的细胞团块,获得分离良好的细胞悬液、且细胞活力高(>70%);此外,了解您所研究细胞的大小范围也很重要。细胞大小通常与细胞表达的转录本数量有关。各种尺寸不同的细胞(一般直径不大于50μm)均可与我们基因表达解决方案中使用的BD Rhapsody平台兼容。一般来说,细胞制备方案将根据组织来源和细胞类型而变化。每种组织类型都是独特的,因此,必须在开始任何单细胞实验之前优化样本制备,烈冰多年样本解离消化经验,累积10+物种、50+组织的消化protocol,若您的样本为组织,且尚未成功将组织样本消化成单细胞悬液,烈冰将尽可能提供技术及实验上的帮助。单个细胞的基因结构和基因表达状态,并鉴定细胞的类型。湖南BD单细胞多组学测序
烈冰生物BD Rhapsody平台,采用精简的工作流程助力您的实验成功: 1.制备单细胞悬液:可使用碧迪医疗单细胞多样本分析试剂盒和 /或BD Ab-seq寡核苷酸偶联抗体( Ab-Oligos)将细胞染色 2.微孔板预充和处理:使用自动移液器进行液体交换 3.单细胞捕获工作流程: (1)细胞上样:上样 575微升细胞悬液;系统未采用微流体通道设计,无需担心通道堵寨;通过重力轻轻沉淀细胞,可捕获脆弱细胞,BD Rhapsody微孔板包含大于220,000个分区,可在低双细胞率下捕获多达40000个细胞 (2)细胞上样扫描:估算捕获的活细胞数量和细胞多态率 (3)磁珠上样:微孔的正六边形几何形状和尺寸可防止磁珠多重分配在微孔中 (4)磁珠上样和磁珠洗涤扫描:估算包含活细胞和磁珠的微孔数量;测定细胞存留率,评估是否发生细胞损失 (5)细胞裂解:使用裂解缓冲液,确保细胞完全裂解 (6)磁珠回收:轻松、高效地磁性回收磁珠并采用Scanner扫描磁珠回收情况广东BD VDJ单细胞测序服务附加流式分选细胞表面Marker,对于较低分辨率的标志物也能有效鉴定,助力高要求测序项目。
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多样本数据合并:Fraction of Reads Kept:合并样本时,各样本根据Mapped Barcoded Reads per Cell数量计算出来的数据利用率。如果各样本间该参数值相差很大,需要进行Downsample处理,以数据量少的样本为基准将不同样本中细胞测序深度标化到同一水平,从而避免因测序深度差异导致的基因检测数量、基因表达水平的差异。烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据,深度解读数据分析结果,深入挖掘其背后的生物学意义;从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究,加速科研进程!十二年测序经验,累计服务与5000余项重要科研项目。
由于高通量测序实验方法相关的测序成本,使得单细胞实验往往非常昂贵,烈冰生物BD Rhapsody单细胞测序服务珍视您的每一份样本,在平台搭建前,我们测试评估了BD Rhapsody的性能,与BD官方公布的数据结合来看,将人293T和小鼠NIH/3T3细胞的1:1混合物以不同浓度上样到BD Rhapsody卡式芯片上。存储的cDNA分子普遍扩增并进行低通量测序(每个细胞月8700个读数)。在测序数据中检测到1109个细胞的上样条件下,每个细胞中,来自每个细胞的平均99.4%的分子经检测为人或小鼠,这表明微孔之间的串扰非常小,在测序数据中检测到1000个或更少细胞的上样密度下,多重态发生率接近零,并且在15000个细胞下小于5%。深度的单细胞测序数据解读助力医疗健康大时代。苏州single cell RNA单细胞多组学测序
十二年测序经验,烈冰生物单细胞多组学领域的佼佼者。湖南BD单细胞多组学测序
烈冰生物BD Rhapsody单细胞分析系统,可平行分析成千上万个单细胞内数千个基因的表达水平,单细胞RNA-seq正在改变我们对细胞的理解。而烈冰作为多平台的技术服务提供商,基于BD 在生物学领域40年的专业技术,满足您的实验需求,在单细胞水平理解细胞形态和功能。BD单细胞测序分析系统克服了传统检测的局限性,如微阵列和大量细胞RNA-seq,这些技术检测通过实现对各个细胞之间的微妙差异的观察,依赖于对多个细胞的平行检测。用户可以鉴定和表征新型和罕见细胞类型,其进一步帮助理解从免疫学到疾病发展的多个领域内的生物学过程。湖南BD单细胞多组学测序
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