重庆高通量测序单细胞测序数据分析培训班

二代测序技术在测序方法上取得了重大突破，基于“边合成边测序”（sequencing by synthesis）和大规模平行测序技术（massive parallel analysis,MPS），使测序通量和读取速度得到极大提升，例如Illumina Solexa测序仪。Illumina的测序原理可以简化为四步：样品文库构建、簇生成、测序和数据分析。由于读长限制，样品DNA或由RNA逆转录得到的cDNA需要被打断成300-500bp的片段，并在3'和5'端接上3种序列：1）Index，用于区分样品来源；2）Adapter，用于结合测序通道上的位点；3）Primer binding site，用于结合PCR引物启动扩增反应。基因测序相关产品和技术已由实验室研究逐渐演变到临床应用，是下一个改变世界的技术。重庆高通量测序单细胞测序数据分析培训班

细胞计数和活力评估在评估样本质量时，需要在细胞清洗和过滤之后测定细胞活力，这一点至关重要。测定细胞活力有许多种方法，烈冰多年单细胞测序经验发现台盼蓝法在鉴定活细胞与死细胞的比例时效果很好。细胞计数的准确性以及目标回收量和实际回收量之间的一致性，取决于我们了解样本中有多少个细胞。一旦过滤和清洗完成，可采用细胞计数设备（如血球计数器或自动细胞计数仪）进行定量。这些设备不但能提供准确的细胞计数，还能计算出向微流体芯片上样适量细胞所需的细胞悬液体积。南京10X单细胞测序多组学测序烈冰开展了单细胞转录组、单细胞多组学以及空间转录组等多种产品在内的全套科研解决方案。

一味的追求高细胞数量的捕获，小心得不偿失，原因在这：单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行，而细胞聚类是在区分cell和non-cell后，获得细胞基因表达谱，通过降维（pca），无监督聚类以及可视化（t-SNE）得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式，因此即使是相同的数据，在剔除几个细胞的情况下，前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时，无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据，都会对正常细胞聚类产生影响，造成聚类结果失真。这也是很多文章，特别是很多高分文章，为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时，数据量在100G左右时，可以满足分析和文章发表的多重需求。

现有的单细胞测序技术阵营在几个主要领域存在差别。一个是分隔单个细胞以在其中进行微反应的物理平台。在这个空间，单个细胞的内容物释放，转录本或其他生物分析物被标记或添加索引，以便下游识别。现有技术的另一个主要区别是如何添加索引，就像生成测序文库所涉及的流程步骤一样。10X Genomics单细胞测序平台采用动态微流控技（Drop-Seq具有类似的技术原理）。从横向孔道中逐一输入凝胶微珠，其中一列纵向孔道输入细胞，凝胶微珠与细胞碰撞后会吸附在凝胶微珠上，并通过微流控技术，将之输入到第二纵向孔道，即油相孔道中。这时候，就形成了一个个油滴并输出并收集在EP管中。每一个油滴中会落入一个细胞以及一个凝胶微珠，那么在每一个凝胶微珠中上长满了不同的Cell Barcode和UMI Barcode连接形成的序列，再加上一端PolyT的抓手，构成我们的捕获凝胶微珠。而这个凝胶微珠抓手就会使用oligo dT抓住mRNA构建文库。烈冰对于一个细胞群体中的每个细胞单独进行建库测序分析。

RNA测序（RNA-seq）或芯片分析等大量样本的转录组学方法作为一类强大的工具，可提供混合样本的基因表达平均数据，帮助科学家开始揭示这种异质性。随后，技术创新的飞跃在单细胞技术上达到新高度——使得科学家能够定义细胞类型特异的基因表达，从过去的平均数据中分辨出真正驱动其表达模式的细胞异质性。这让研究人员能够更详细地表征组织异质性，鉴定稀有细胞类型，并逐个细胞地仔细分析其分子机制。当获得了对其研究的生物系统更为真实的图谱后，研究人员就有了更为坚实可靠的知识基础，并能在这个基础上规划下一步实验，以获取更深入的可行动见解。附加流式分选细胞表面Marker，对于较低分辨率的标志物也能有效鉴定，助力高要求测序项目。天津二代测序单细胞测序服务公司

烈冰测序数据分析平台，不依赖已有物种信息，可研究非模式物种，针对不同平台的数据，制定多套流程；重庆高通量测序单细胞测序数据分析培训班

所谓的高通量测序技术，又名大规模平行测序，是将 DNA（或者 cDNA）随机片段化、加接头，制备测序文库，通过对文库中数以万计的克隆(colony)进行延伸反应，检测对应的信号，获取序列信息。与传统测序法（Sanger法等）相比，高通量测序技术在处理大规模样品时具有明显的优势，又快（两天）又多（数百万克隆），成为目前组学研究的主要技术。单细胞测序是一个系统的工程，开展项目前您可能会先评估它提供的见解是否与您的研究问题相匹配，如果匹配，实验过程如何规划，实验平台如何选择，样本如何制备，数据如何分析等等，而在这一切开始之前，我们的服务就已经开始了，从销售到实验到专业技术支持，我们开通全线对接渠道，帮助您快速定位项目诉求，提供从实验设计到文章发表的全流程，我们始终是您贴心的科学合作伙伴。重庆高通量测序单细胞测序数据分析培训班

上海烈冰生物医药科技有限公司位于江月路999号奇亚特中心22幢，交通便利，环境优美，是一家服务型企业。是一家有限责任公司（自然）企业，随着市场的发展和生产的需求，与多家企业合作研究，在原有产品的基础上经过不断改进，追求新型，在强化内部管理，完善结构调整的同时，良好的质量、合理的价格、完善的服务，在业界受到宽泛好评。公司拥有专业的技术团队，具有单细胞测序，生物大数据云分析平台，空间转录组测序，单细胞多组学测序等多项业务。烈冰生物顺应时代发展和市场需求，通过**技术，力图保证高规格高质量的单细胞测序，生物大数据云分析平台，空间转录组测序，单细胞多组学测序。