10XVisium的实验主要分为两部分:组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像,记录切片的形态学信息;组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序,记录切片的转录本信息和空间位置信息。具体实验流程如下:A、切片制备和优化:取新鲜组织、冷冻、切片,并进行HE染色成像,优化确定切片是否覆盖靶向区域。B、切片固定和透化:将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上,并进行固定和透化,使细胞中的mRNA得到释放,并结合到相应的捕获探针上,从而获取基因表达信息。C、逆转和文库构建:以捕获的RNA为模板,进行cDNA合成,和测序文库制备。D、高通量上机测序:对制备好的测序文库,进行二代高通量短读长测序。E、数据可视化分析:结合HE结果,确定哪些基因有表达,表达量高低,以及这些基因的空间位置信息烈冰一站式多平台测序服务:立足科学研究,解码生命本质。合肥烈冰生物空间转录组商业化服务
空间转录组测序的关键就在于,解决了空间位置保留的问题。被放置在芯片区域内的冰冻组织切片在经过H&E染色和成像记录后,会被进行透化处理,释放细胞中的RNA。芯片上的捕获引物的中段设置了带有独特标识的条形码区域。芯片被划分为了数个不同的捕获区域,每个捕获区域中锚定的引物都带有不同的条形码序列。每个区域对应的组织位置会被记录下来,然后再进行测序后,通过条形码将不同区域的测序结果,映射到对应的组织位置上,拼贴形成组织样品的空间转录组图像。南京scRNA空间转录组服务机构ATCG碱基的排列组合构成了测序的庞大世界。
空间转录组数据可以用单细胞转录组数据的分析策略进行分析,例如,利用GO和Pathway分析筛选不同发育时期特定空间区域内的信号通路及其关键基因的较大情况,揭示在特定发育时期特定区域内发生的生物学过程。针对任何一个基因,空间转录组可以显示表达该基因的点阵及其空间排布;单细胞转录组可以给出该基因表达的细胞类群;原位测序可以给出该基因在细胞内的表达状况。通过不同发育时间点的信息比较,可以分析细胞类群在某个部位在不同时间点的差异,给出其在细胞内的真实的演变状况。
空间转录组测序的数据质量和玻片有效区域的利用率、贴片的质量和透化时间息息相关。贴片质量不良会影响总的有效spot数等;而透化不合理会导致spot的reads数、基因中位数等参数。而在特异性基因表达方面,我们也可以统计空间转录组群体的特异性基因表达即Markergene,将他们在组织切片以及空转上进行着色。我们也可以对于任意一个已知的基因或者数据库中的一些细胞Marker,然后将其在基因表达在空间转录组的切片以及HE染色上展示自己的基因表达进而了解,群体中的可能的细胞组成关系。基因测序相关产品和技术已由实验室研究逐渐演变到临床应用,是下一个改变世界的技术。
机体为响应各种应激,其细胞会从一种功能“状态”转变为另一种功能“状态”;当细胞在不同状态之间转变时,往往会经历转录重组,导致一些基因被“沉默”,一些基因被重新“唤醒”,但纯化这些瞬态细胞进行研究是很困难或不可能的;scRNA-seq拟时序分析可以让我们在不需要纯化的情况下查看这些细胞状态。拟时序分析,即根据不同细胞亚群基因表达量随时间的变化情况,构建细胞谱系发育,但这里的时间并不是真时间,而是一个虚拟的时间,是指的细胞与细胞之间的转化和演替的顺序和轨迹。即使在同一个样本中,也会存在多种不同的细胞形态。因此,不论测定了多少样本,我们都可以采用拟时序分析对样本中的细胞转化和变化进行描述。个性化制定测序项目方面,满足从检测基因到蛋白的多组学测序要求。深圳高通量测序空间转录组测序服务公司
空间转录组测序技术提供了空间转录组水平下的科学研究视角。合肥烈冰生物空间转录组商业化服务
所谓的高通量测序技术,又名大规模平行测序,是将DNA(或者cDNA)随机片段化、加接头,制备测序文库,通过对文库中数以万计的克隆(colony)进行延伸反应,检测对应的信号并获取序列信息。与传统测序法相比,高通量测序技术在处理大规模样品时具有强大的优势,又快(两天)又多(数百万克隆),成为目前组学研究的主要技术。空间转录组测序是一个系统的工程,开展项目前您可能会先评估它提供的见解是否与您的研究问题相匹配,如果匹配,实验过程如何规划,实验平台如何选择,样本如何制备,数据如何分析等等,而在这一切开始之前,我们的服务就已经开始了,从销售到实验到专业技术支持,我们开通全线对接渠道,帮助您快速定位项目诉求,提供从实验设计到文章发表的全流程,我们始终是您贴心的科学合作伙伴。合肥烈冰生物空间转录组商业化服务
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