报告基因选用GFP或RFP，**小启动子来自斑马鱼gata2基因；将上述载体与体外转录得到的Tol2转座酶的mRNA共同注射到斑马鱼的单细胞受精卵中，受精卵长大后成为founder；Founder外交（out-cross）得到F1代胚胎，从中挑选出对于报告基因具有组织特异性表达模式的胚胎，拍照记录后分类培养；F1长大后通过linker-mediatedPCR的方法鉴定对应于GFP（或RFP）表达图式的Tol2插入位点，并通过与已知基因组数据比较，对插入位点进行定位与分析；通过外交纯化得到转基因鱼，直至得到只含有单个插入品系的转基因鱼。斑马鱼是什么?斑马鱼试验的来源及特色?斑马鱼药物筛选方法
1、斑马鱼可应用于发育生物学的细胞谱系分析、突变鉴别、饱和诱变分析、基因转移研究、基因连锁图的构建，其体外受精、胚体透明、细胞分裂快等特点使它比起大小鼠有独特优势。2、基因功能研究：斑马鱼繁殖速度快，能提供足够量的胚胎用于基因筛选；其胚体透明的特点可以一目了然地观察到基因突变后的表型变化。3、疾病发病机制研究：斑马鱼的发生、疾病生理、基因组与人类相似度较大，主要信号通路和基因具高度同源性，诸多斑马鱼疾病（如血、免疫性系统疾病、疾病等）模型已建立，利用斑马鱼的疾病模型来研究人类相关疾病是近年全球热点的科研项目。斑马鱼模式生物公司利用斑马鱼实验成效点评。
斑马鱼作为模式生物的起源和发展1938年，美国布朗大学Roosen-Rung教授***报道斑马鱼发育形态学研究成果。1950年代，美国罗格斯大学K.KennethHisaoka教授***报道斑马鱼毒理学研究成果。1972年，美国俄勒冈大学GeorgeStreisinge教授开始斑马鱼发育生物学研究和模式动物建立工作。1989年，美国俄勒冈大学MonteWesterfield教授出版斑马鱼研究圣经TheZebrafishBook***版。1998年，较早斑马鱼模式生物数据库ZFIN成立。1998年，全球***家斑马鱼药物研发服务外包公司成立。2004年，斑马鱼国际资源中心（ZIRC）在俄勒冈大学成立。2011年，斑马鱼模型和技术研究被列入中国科技部「重大新药创制」专项十二五实施计划。2012年，中国国家斑马鱼资源中心成立。目前，斑马鱼已经成为继小鼠和大鼠之后的第三大脊椎类模式生物，在发育生物学、遗传学、基础医学、药理学、毒理学、药物研发以及生态环境评价等诸多领域得到了广泛应用。
截止目前，环特生物已通过国家CNAS实验室认可、CMA资质认定及 AAALAC国际实验动物认证。多项技术成果先后荣获德国纽伦堡国际发明金奖、英国国际发明展金奖及杰出创新奖、俄罗斯“新时代”第十六届国际发明与新技术展金奖、第48届日内瓦国际发明展银奖等国际大奖。近年来，环特生物承担省级（含）以上科研项目8项，相继被评为国家高新技术企业、浙江省科技型中小企业，且设有院士**工作站、省级高新技术企业研发中心、浙江省博士后工作站等科研平台，并与中国农科院质标所成立了“农业农村部农产品质量标准研究中心生物评价实验室”的联合创新平台。传统的免疫学模式生物相比便于开展大规模研究。
空间学习与回忆空间学习回忆是外显回忆的一种长时间存储方式。和哺乳动物相同，越来越多的证据表明硬骨鱼也具有学习和回忆的特性和神经基础。利用隐藏的的学习设备对鱼类的空间学习和回忆才能进行了点评和测试。该仪器与以前报道所描绘的相同，由发动室、奖赏室和连接这两个室的两个隧道组成。在练习或测试中，迷宫被注入10厘米深的水，水的温度与实验水箱的温度相同。两周的学习练习和回忆评价基本上是像其他地方描绘的那样进行的。空间学习练习从露出前7天开端，露出后7天完毕。每天进行一次练习，每组10条鱼放入发动室，30秒后开释这些鱼，在迷宫中探索30分钟(左面或右边的通道都是翻开的)。回忆评价为10分钟(每组一个)。在本研讨中，我们计算了奖赏室中鱼的总数和鱼在不同片段中所花费的时间。斑马鱼毒性检测实验意义及作用！斑马鱼毒理实验
荧光标记斑马鱼，神经发育实验中，神经元活动轨迹清晰可见，为脑科学研究提供关键线索。斑马鱼药物筛选方法
还记得2015年12月份CFDA批准进行临床试验两个1.1类化药新药吗？浙江仙琚制药股份有限公司的奥美克松钠及其注射剂和北京市**防治研究所的1.1类血管生成抑肽及其注射剂。作为这两个新药临床前研发的参与者之一，环特生物的斑马鱼平台在其中发挥了重要作用，听我们说说其中的故事吧奥美克松钠是由浙江仙琚制药与杭州奥默公司一起研制的***神经肌肉阻滞的药物，其申报适应症为在全麻手术中逆转不同浓度罗库溴铵、维库溴铵（这两种药物都是手术中常用的麻醉剂）诱导的神经肌肉阻滞，也就是麻醉肌松类药物。奥美克松钠属于重大专项品种，也是特殊审评，从申请临床到获批历时16个月。奥美克松钠的作用机制与默克的Bridion类似。Bridion用于逆转常规使用的神经肌肉阻断药罗库溴铵或维库溴铵的作用，是较早具有高度选择性的肌松药拮抗剂，被业内认为是近年来***领域的重大进展。斑马鱼药物筛选方法
