膜片钳技术是一种用于研究生物细胞膜离子通道的实验方法。它通过在细胞膜上形成小孔,从而对细胞膜的离子通道进行精确的电生理记录和描述。在膜片钳实验中,研究人员通常会先将细胞膜上的脂质双层通过特殊设备进行穿刺,形成一个小孔。然后,他们将一个玻璃微电极插入这个小孔中,以接触并测量细胞膜内部的电位变化。这个玻璃微电极的端非常细,不会对细胞膜产生太大的干扰。通过膜片钳技术,科学家可以精确地测量离子通道的活动,从而了解离子通道在细胞生理学中的作用。例如,他们可以测量离子通道在不同刺激下如何开启或关闭,以及这些变化如何影响细胞的电活动和化学信号传递。此外,膜片钳技术还可以用于研究和鉴定新的药物靶点。通过观察药物对离子通道活动的影响,科学家可以评估新药对特定疾病的zhi疗潜力。总的来说,膜片钳技术是一种非常有用的实验方法,它为我们提供了深入研究细胞膜离子通道以及药物作用机制的工具。微电极的制备膜片钳电极是用外径为1-2mm的毛细玻璃管拉制成的。美国膜片钳市场价

膜片钳技术与其他技术的结合Neher等**将膜片钳技术与Fura2荧光钙测量技术相结合,同时进行细胞内荧光强度、细胞膜离子通道电流、细胞膜电容等多项指标变化的快速交替测量,从而获得同一事件过程中各因素的各自变化,进而分析这些变化之间的关系。Neher将能够光解钙离子的钙螯合物引入膜片钳技术,进而可以定量研究钙离子浓度与分泌速率的关系以及相对较大的分泌速率。他还发明了膜片钳的膜电容检测与碳纤维电极的电化学检测相结合的技术。然后***将光电联合检测技术和碳纤维电极电化学检测技术相结合。这种结合既能研究分泌机制,又能鉴定分泌物质,弥补了各单一方法的不足。Eberwine于1991年***将膜片钳技术与RT-PCR技术相结合,可以在分子水平上解释形态相似但电活动不同的结果,随后开始了膜片钳与分子生物学技术相结合的时代:基因重组技术和膜通道蛋白重建技术。膜片钳厂家由于膜片钳检测的是PA级的微电流信号,因此需要特殊的放大器及模数转换器。

对单细胞形态与功能关系的研究,将膜片钳技术与单细胞逆转录多聚酶链是反应技术结合,在全细胞膜片钳记录下,将单细胞内容物或整个细胞(包括细胞膜)吸入电极中,将细胞内存在的各种mRNA全部快速逆转录成cDNA,再经常规PCR扩增及待检的特异mRNA的检测,借此可对形态相似而电活动不同的结果做出分子水平的解释或为单细胞逆转录多聚酶链式反应提供标本,为同一结构中形态非常相似但功能不同的事实提供分子水平的解释。目前国际上掌握此技术的实验室较少,我国北京大学神经科学研究所于1994年在国内率先开展。
1937年,Hodgkin和Huxley在乌贼巨大神经轴突细胞内实现细胞内电记录,获1963年Nobel奖1946年,凌宁和Gerard创造拉制出前列直径小于1μm的玻璃微电极,并记录了骨骼肌的电活动。玻璃微电极的应用使的电生理研究进行了重命性的变化。Voltageclamp(电压钳技术)由Cole和Marmont发明,并很快由Hodgkin和Huxley完善,真正开始了定量研究,建立了H一H模型(膜离子学说),是近代兴奋学说的基石。1948年,Katz利用细胞内微电极技术记录到了终板电位;1969年,又证实N—M接触后的Ach以"量子式"释放,获1976年Nobel奖。1976年,德国的Neher和Sakmann发明PatchClamp(膜片钳)。并在蛙横纹肌终板部位记录到乙酰胆碱引起的通道电流。膜片钳技术的建立,对生物学科学特别是神经科学是一资有重大意义的变革。

膜片钳技术本质上也属于电压钳范畴,两者的区别关键在于:①膜电位固定的方法不同;②电位固定的细胞膜面积不同,进而所研究的离子通道数目不同。电压钳技术主要是通过保持细胞跨膜电位不变,并迅速控制其数值,以观察在不同膜电位条件下膜电流情况。因此只能用来研究整个细胞膜或一大块细胞膜上所有离子通道活动。目前电压钳主要用于巨大细胞的全性能电流的研究,特别在分子克隆的卵母细胞表达电流的鉴定中发挥着其他技术不能替代的作用。该技术的主要缺陷是必须在细胞内插入两个电极,对细胞损伤很大,在小细胞如元,就难以实现,又因细胞形态复杂,很难保持细胞膜各处生物特性的一致。在膜电位改变时,在电场的作用下,重新分布导致通道的关闭,同时有电荷移动,称为门控电流。进口高通量全自动膜片钳产品介绍
离子通道是一种特殊的膜蛋白,它横跨整个膜结构,是细胞内部与部外联系的桥梁和细胞内外物质交换的孔道。美国膜片钳市场价
离子通道的近代观念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世纪30—50年代的开创性研究。在1902年,Bernstein创造性地将Nernst的理论应用到生物膜上,提出了“膜学说”。他认为在静息状态下,细胞膜只对钾离子具有通透性;而当细胞兴奋的瞬间,膜的破裂使其丧失了选择通透性,所有的离子都可以自由通过。Cole等人在1939年进行的高频交变电流测量实验表明,当动作电位被触发时,虽然细胞的膜电导大为增加,但膜电容却只略有下降,这个事实表明膜学说所宣称的膜破裂的观点是不可靠的。1949年Cole在玻璃微电极技术的基础上发明了电压钳位(voltageclamptechnique)技术美国膜片钳市场价