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“做miRNA下调,QPCR检测miRNA,表达水平无变化”,这到底是怎么回事?现有miRNA抑制手段,无论是基于载体构建的、还是化学合成的,本质上都是用跟成熟体互补的反义miRNA(miRNA海绵体属于不完全互补的反义RNA重复),其可以通过结合miRNA,阻断其与靶基因结合,但并不能有效引发miRNA的降解,原因有两方面:其一是反义RNA与miRNA结合后,序列很短,导致Dicer酶(细胞内降解双链RNA的主角)不能有效结合;其二是miRNA与Ago2以RISC复合物的形式存在,该复合物也会导致Dicer酶无法高效结合。因此,如果以反义RNA技术抑制miRNA功能,QPCR可以做,如果检测出表达水平下降还好,即便未检测到,也不表示抑制无效,正确的做法是直接检测目的基因蛋白水平是否有上调。但若实验者不清楚靶基因的情况下,不检测到miRNA下调,心里是没底的。瑞普信生物技术有限公司专做第三方检测细胞实验靠谱吗?
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