“做miRNA下调，QPCR检测miRNA，表达水平无变化”，这到底是怎么回事？现有miRNA抑制手段，无论是基于载体构建的、还是化学合成的，本质上都是用跟成熟体互补的反义miRNA（miRNA海绵体属于不完全互补的反义RNA重复），其可以通过结合miRNA，阻断其与靶基因结合，但并不能有效引发miRNA的降解，原因有两方面：其一是反义RNA与miRNA结合后，序列很短，导致Dicer酶（细胞内降解双链RNA的主角）不能有效结合；其二是miRNA与Ago2以RISC复合物的形式存在，该复合物也会导致Dicer酶无法高效结合。因此，如果以反义RNA技术抑制miRNA功能，QPCR可以做，如果检测出表达水平下降还好，即便未检测到，也不表示抑制无效，正确的做法是直接检测目的基因蛋白水平是否有上调。但若实验者不清楚靶基因的情况下，不检测到miRNA下调，心里是没底的。瑞普信第三方检测WB，QPCR，ELISA，细胞实验。自贡科研试剂第三方检测
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WB（Westernblot），即蛋白印迹或免疫印迹（immunoblotting），是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常广的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用，根据显色条带的位置和强弱实现蛋白鉴定和表达分析。WB技术具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性。选用合适的内参抗体能够校正蛋白定量和上样过程中的误差，通过灰度计量可以定性或定量分析不同样品中蛋白表达情况。做第三方检测时为什么有时候条带会出现拖带或者弯曲？在使用特定裂解缓冲液时，或者一些植物或脂肪含量高的样品中成分较复杂，会对电泳条带产生干扰；样品变性不彻底、有降解发生、修饰、上样过大等情况会导致拖带，凝胶不均匀、电泳装置渗漏、电压/电流过大、胶孔不平等原因会导致条带弯曲，当很小分子量的蛋白电泳到接近凝胶下沿时也会出现条带扭曲。自贡科研试剂第三方检测
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