数字PCR基本参数
  • 品牌
  • 臻准、锐讯生物
  • 型号
  • DropDx-2044数字PCR系统、 AccuONE系列
  • 类型
  • pcr仪
数字PCR企业商机

使用ddPCR的一个主要优点在于,定量不是相对的。微滴式数字PCR计算事件的数量,因此可以确定检测极限和比较低起始量,以便达到所需的灵敏度。在连续监控或比较不同患者的效果时,这可以更准确地比较负荷,因为所测得的丰度不是相对的。经过实验证实,ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能够检测患者cfDNA样品中的KRAS突变(图2)。这些患者的血浆样品购自ConversantBio和ProMedDx,之前已通过FFPE基因分型被分为KRAS突变阳性或阴性。欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。数字PCR的应用甚广,除了可应用于进行突变的检测以外,也可运用于基因扩增的检测。德国全自动数字PCR价格

相比于qPCR,dPCR在转基因检测中具有以下优势:(1)检测灵敏度高:理论上dPCR的灵敏度可达1个拷贝,而实际应用中dPCR的小检出限和比较低定量限数值非常接近,所以dPCR可以在非常低的目标拷贝数下得到精确的结果;通常转基因比参考基因(内源基因)浓度低很多;(2)前处理简单且受基质成分干扰较小:dPCR反应效率和精密度受到食品基质成分干扰影响较小,可应用于混合基质样品中低丰度DNA的检测;(3)dPCR对抑制剂的敏感性较低:由于dPCR结果表示为“有荧光“或“无荧光”,即使存在抑制剂降低了荧光强度仍可以表示为“有荧光;(4)适合多重转基因检测:食品或饲料提取的DNA中可能包含多种转基因片段,可以进行多重dPCR检测,提高分析效率。同时,dPCR可以直接溯源至SI国际单位制摩尔,适合单一、双重及多重转基因标准物质研究,一次可识别不同的转基因区域。下面详细进行说明。德国医疗系统认证数字PCR市场前景数字PCR等新兴技术要在临床应用上得到爆发式增长,有赖于LDT市场的放开。

基于微滴的QX100dPCR仪,利用油包水技术,将样品平均分配到20000个微滴油包水中,利用微滴分析仪对微滴进行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR仪,在高压气体驱动下,将每个标准反应体系分割成包含100万至1000万个皮升级别微滴的反应乳液。数字PCR就形成了2大派别,芯片式和微滴式。不论是哪种数字PCR,其原理都是有限稀释,终点PCR和泊松分布。将含有核酸模板的标准PCR反应体系,平均分配成几万个PCR反应,分配到芯片或微滴中,使每个反应中尽可能含有一个模板分子,进行单分子模板PCR反应,通过读取荧光信号的有或无进行计数,经过统计学泊松分布的校准进行定量。

在荧光定量PCR应用已经如此的情况下,缘何数字PCR仍然能横空出世?中心点在于荧光定量PCR尽管为科研和临床市场应用提供了非常重要的检测工具支撑,但仍然有尚未被满足的客户需求。荧光定量PCR需要基于标准品制作的标准曲线进行定量,属于相对定量,操作较为复杂,且终端用户对其结果的重复性、灵敏性、精密度、分辨率、对PCR反应抑制剂的耐受性等方面有更高的期待。数字PCR通过将反应体系进行有限稀释至成千上万的反应单元中,实现了核酸靶标的单分子扩增。PCR扩增结束后,基于终点法对阳性液滴数和总液滴数进行计数,结合泊松分布原理,从而实现对起始样本的定量。其极大地简化了操作步骤,并且大幅提高了检测性能,尤其在低丰度或较低丰度的核酸检测上(灵敏性可达0.001-0.0001%),其优异的性能得到了终端用户的认可。dPCR仪器在操作中集成了前处理以减少手工移液和样品转移的操作,增加了通量,并在价格上具有优势。

dPCR的测量结果通常表示为含量,即拷贝数值或转基因质量百分比,而QPCR结果通常表示为拷贝数的质量分数。目前市场上可购买到大多数转基因标准物质,以qPCR定值的标准物质是以拷贝数(单倍体基因组当量)的质量分数来表示特性量;以dPCR定值的标准物质直接采用拷贝数比例来表示特性量。不同方法使用不同的表示方式,会造成测量结果不可比。因此质量分数、拷贝数和拷贝数比例之间的关系需要转化,才能得到单位一致,数值可比的数据。EU联合研究中心建议使用转换因子从拷贝数换算到质量分数。国产dPCR企业在上述应用领域不断与伯乐、赛默飞、罗氏、凯杰、因美納等头部企业展开竞争,抢占市场份额。上海国产数字PCR分析应用

数字PCR是通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元,每个单元至少包含一个拷贝的目标分子 。德国全自动数字PCR价格

作为时下的热点技术,数字PCR是将核酸样品分配到大量单独、平行的微反应单元(nL,纳升级别)中,使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子,并在此基础上进行扩增、检测和分布统计,从而实现靶标分子的比较 计数。(图:数字PCR技术原理)根据微反应单元的不同形式,数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前,市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式,如Bio-Rad公司的QX200微滴式系统和ThermoFisher公司的QuantStudio系统等。与一、二代PCR技术相比,数字PCR具有很多优势:一是特异性、灵敏性均有显著提高;二是在不依赖内参和标准曲线的前提下,可直接得到比较 量化指标;三是微反应单元相互独立、封闭,避免了PCR抑制剂及不同核酸分子扩增产物间的相互干扰,准确度和可重复性较高。德国全自动数字PCR价格

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