外泌体研究常见问题解答122.做外泌体研究,需要多少量的蛋白质?不建议过多关注蛋白质浓度,我们的经验,蛋白质测量与制剂中外泌体的数量之间几乎没有相关性。蛋白量不应作为制剂中外泌体数量的估计。外泌体与蛋白量并不总是一个很好的相关性。我们主要使用细胞培养基和尿液作为起始样本,即使在这种“简单”的溶液中(至少与血浆/血清相比),相关性也不是很好。这就是为什么我们开始关注细胞培养生长条件,并标准化外泌体收获条件,以便在正确的时间收获并提高系统的可重复性。血浆和血清中蛋白质浓度和外泌体含量之间的相关性会更小。许多研究人员使用纳米颗粒跟踪分析(NTA)来测量囊泡的数量和大小分布,但这种方法不能提供相同大小范围内任何污染囊泡的信息。因此,电子显微镜应始终与这种方法相结合。检查污染囊泡存在的一种方法可能是进行蛋白质印迹以检测蛋白质,如gp96,一种ER相关蛋白。3.外泌体WB鉴定时,选择哪个内参蛋白?无内参蛋白。外泌体包裹的蛋白具有随机性,同时不同细胞分泌的外泌体具有异质性,所以外泌体中没有哪种蛋白含量是恒定的,也就没有所谓的内参蛋白了。目前的外泌体WB鉴定,只能用于定性检测。外泌体研究工具标准化质量检测,每批次严格质控,保障实验可靠性。血浆EVs功能研究

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外泌体标记真的只能用PKH和DiR吗?外泌体作为近几年的“科研新贵”,可谓是红极一时。由于它们具有独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力,是非常有前途的递送载体。然而,目前在外泌体的示踪研究和应用上还存在一些难点:难点一:目前对于胞外囊泡的标记方法有很多种,包括亲脂性的染料(如:PKH、Dil等),这些染料与外泌体膜不是共价结合,而是通过疏水相互作用短暂结合在一起的。在后续的细胞摄取时,会出现示踪染料在不同膜结构或脂溶性物质间发生不断解离和结合的现象,从而影响结果的准确性。ps:分离的外泌体中也会存在一些脂质,也会与示踪试剂结合。难点二:目前外泌体等胞外囊泡有一部分的归宿是在溶酶体,而溶酶体的酸性环境,绝大多数外泌体示踪染料发出的荧光都会淬灭,那么这一部分外泌体的去向就难以检测到。该外泌体示踪试剂盒来自维思克思生物科技,是该公司两项发明专利转化而来,对比其他染色方法,该探针具有低背景、高效率、强耐酸的优势!产品信息:ExosomeWisTracker-IIKit(WSR0001-2)。
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