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外泌体研究常见问题解答83.外泌体是如何可视化和/或计数的？外泌体太小（30–150nm），无法使用常规显微镜观察，因为这于大小至少为几微米的物体。光学显微镜的分辨率太低，无法观察外泌体。外泌体大小分布的典型分析方法包括纳米粒子跟踪分析（NTA）、纳米流式和电子显微镜。尽管在方法上非常不同，但这些技术都允许你研究尺寸低至10纳米的纳米颗粒。要确定样本中外泌体的浓度，可以使用NTA、纳米流式。它们通过不同的原理对纳米颗粒（10–1000nm）进行计数和粒径测定。NTA可能是获得溶液中颗粒平均尺寸和浓度信息的常用方法。然而，这种方法无法区分大小相同的囊泡和蛋白质聚集体。因此，我们建议将这种方法与显微镜技术相结合，以验证膜的存在。4.外泌体电镜是不是一定要有膜结构，无膜结构的球体是外泌体吗？负染电镜结果中外泌体的形态肯定是那种明显的茶托样或者大饼样的！边缘有一圈略微更明亮的亮圈。如果你打到的结构是没有膜结构的圆球形，那么您很可能看到了脂蛋白颗粒或者抱团的蛋白质。外泌体研究工具原料利用率优化，降低单位实验成本，提升性价比。诺奖Extracellular Vesicles转录组

外泌体研究常见问题解答91.外泌体的分离方法有哪些，哪种更好？分离是进行外泌体研究关键的一步，只有选择了合适的方法才能得到理想的实验结果。分离方法包括：超速离心、尺寸排阻、免疫磁珠、聚合物沉淀、亲和磁珠/膜等方法。根据外泌体的大小，密度和表面标志物的不同进行分离，不同提取外泌体方法优劣势比较，受限于篇幅，详细版请联系维思克思生物科技获取。2.细胞培养上清中死细胞对外泌体分离的影响？在细胞凋亡/死亡过程中会释放大量Evs，会混入活细胞分泌的外泌体中，而目前的外泌体分离方法并不能将两者区分开来。所以在收集细胞培养上清样本时，需要保证细胞活率应不小于95%。3.大体积的样本类型，如何分离外泌体？大体积样本，如细胞培养上清、尿液等，可以先浓缩样本（如超滤或外泌体浓缩试剂等），减少样本体积，再使用常规的外泌体分离方法。4.复杂的样本类型，如何分离得到高纯度的外泌体？复杂的样本类型如血清、血浆、奶制品、脑脊液等，含有很多与外泌体在尺寸和密度接近的杂质，常规的外泌体分离方法难以获取高纯度的外泌体，建议使用亲和的外泌体分离方法，如PS亲和、免疫亲和、膜亲和等外泌体分离试剂盒。便捷外泌体标准品外泌体研究工具定制化组合方案，按需搭配组件，避免功能冗余浪费。

外泌体研究常见问题解答134.当我的Westerns似乎不起作用时，我该怎么办？这有几个典型的原因：（1）添加的样本量不足。外泌体可能含有相当少量的蛋白质货物。对于初始实验，我们建议添加尽可能多的样本。（2）抗体不是比较好的。我们建议测试2-3家制造商的抗体（如抗CD63或其他外泌体标记物），仔细检查推荐的浓度。此外，它们比较好是新鲜使用，并且需要妥善储存。（3）根据外泌体表面标记，某些凝胶条件可能对靶抗体更为优化（例如还原/非还原和变性/非变性）。我们建议与制造商和外泌体社区核实您所针对的特异性标记物和您所使用的特异性抗体的推荐条件。（4）一般Westerns技术。Western可能很棘手，我们建议使用阳性对照进行初步测试，以确保整个工作流程正常运行。任何蛋白质或抗体都可以使用，只要它们满足您需要的条件（例如变性与非变性）。此外，在挑选蛋白质时，尽量避开样本中浓度非常高或非常低的蛋白质，以防止印迹过载或完全没有信号。

外泌体定量与表征的又一有效补充！外泌体脂质脂质定量试剂盒（比色法）外泌体由磷脂双分子层包裹，包含脂质等代谢物。目前外泌体缺乏有效的定量和表征方法，单一的检测技术都有其局限性。维思克思的WSR0028可用于外泌体的脂质定量，既可测定外泌体的脂质含量，为脂质研究提供有力工具，又能作为外泌体定量和表征方法的有效补充。现有的脂质定量方法大都需要昂贵的仪器，例如HPLC仪器、光散射检测技术等。本产品可替代这些仪器，实现小成本快速检测！产品特点：灵敏度高，检测脂质浓度下限达到5μg/mL。操作简便，需三步即可检测出脂质含量，整个操作时间不超过40min，节约时间。线性范围广，5-1000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。产品信息：ExosomalLipidQuantificationKit(Colorimetric)（WSR0028）。外泌体研究工具高效分离技术，缩短实验周期，提升研究进度效率。

沉淀法外泌体分离试剂盒经典、操作简便的外泌体分离方法！假如你没有超速离心机，假如对提取出的外泌体中含有透明质酸等多糖而头疼不已，那你一定要来试试这款沉淀法分离试剂盒。WSR0026是一款沉淀法外泌体分离试剂盒，可用于多种样本的外泌体分离，具有操作简便、分离速度快和外泌体回收率高等特点。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。使用方法：需要将沉淀试剂加入到样本中孵育，然后高速离心即可得到外泌体。产品优势：适用范围广，血浆、血清等复杂样本和细胞上清、尿液等简单样都适用；回收率高，相较于其他方法，获取的外泌体浓度高；操作简便，不需特殊设备，操作简便；高通量，可同时处理多个样本。产品信息：WisExoExosomeIsolationKit（Precipitation）（WSR0026）。外泌体研究工具高兼容性配方，适配多种样本类型，提升应用范围。间充质干细胞sEVs靶向修饰

外泌体研究工具长效活性维持，多次使用仍稳定，降低重复采购频率。诺奖Extracellular Vesicles转录组

你分离的血清/血浆外泌体真的干净吗？对于血清和血浆等复杂样本，分离外泌体是十分棘手的。主要原因是血液样本的成分比较复杂，很容易造成细胞外囊泡的污染。脂蛋白颗粒就是常见细胞外囊泡难以分离的污染物之一。外泌体与脂蛋白的体积、密度十分相近，以至于很多传统的方法都不能把他们完全分离。1.密度梯度超速离心高密度脂蛋白的密度与细胞外囊泡密度相近，所以它是密度梯度离心主要的污染脂蛋白。低密度脂蛋白虽密度低于EV，但离心的方法还不足以完全将二者分开。因此使用密度梯度超速离心的方式可能无法完全排除脂蛋白污染的可能性。2.分子排阻法（SEC）SEC是根据粒径大小进行外泌体分离。脂蛋白与外泌体尺寸相近，尤其是极低密度脂蛋白与乳糜微粒。因此，也无法通过分子排阻法将脂蛋白与细胞外囊泡完全分离。3.超速离心法在粒径和密度相差不大的情况下，颗粒的沉降速度也相差不大。尤其是脂蛋白颗粒数远超于外泌体时，被称为金标准的超离法也稍显不足了。基于此，维思克思推荐选择磁珠法（WSR0002-2），是基于自主研发的均相液体磁珠，可特异性捕获外泌体而不吸附杂质，实现高纯度外泌体分离。诺奖Extracellular Vesicles转录组

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