慢病毒大规模纯化的捕获步骤包括:膜过滤澄清,随后切向流过滤/超滤或者体积排阻色谱浓缩。此外,需用核酸酶(benzonase或M-SAN HQ中盐核酸酶)来去除细胞残留的、质粒来源的DNA污染。这两个步骤顺序可以调整,依据项目工艺而定。两种工艺路线各有优缺点:先用核酸酶消化的优点是可去除大的DNA片段,且后续步骤可以去除残留核酸酶;但所用的核酸酶的量也非常大。与此相反,将核酸酶步骤后置的优点是大幅降低核酸酶的量(成本降低);但后面的步骤必须有将核酸酶去除的能力。此外,后期用核酸酶的缺点是核酸污染可能会结合慢病毒颗粒形成沉淀,进而导致慢病毒在纯化中流失,从而影响得率。US FDA指南要求:重组biologics终产品中,核酸杂质含量低于10ng/dose。广东ArcticZymes中盐核酸酶70950-160

ArcticZymes Technologies产品大都来源于深海microbes中,具有一些共同的特性。1. 热不稳定性,使酶产品相对容易失活,简化工作流程,方便自动化过程;2. 低温活性,即在低温或常温下具有更高活性,缩短酶与底物的孵育时间,提高反应速度及效率;3. 耐盐特性,是指大部分酶产品能耐受较高的盐浓度,拓宽反应体系范围选择,在特殊体系的应用场景下具有更为出色的性能表现;4. 独特特性,极限酶类产品能够在非常规条件下进行酶促反应,让一些反应从不可能变为可能。云南M-SAN HQ中盐核酸酶70950-160M-SAN HQ ELISA Kit能够定量检测M-SAN HQ中盐核酸酶残留。

细胞基因药物领域的进展使得对高质量基因转移技术的需求急剧增加,包括高质量慢病毒载体(LV)的大规模生产。宿主细胞DNA残留(HCD)是一类主要的工艺相关杂质,对下游纯化带来很大挑战。根据相关法规要求,需要去除HCD才能达到临床级LV。HCD去除是通过核酸酶处理联合下游工艺(DSP)共同实现的。文章作者研究了两款核酸酶M-SAN HQ中盐核酸酶(ArcticZymes Technologies)和Benzonase(Merck)对HCD去除效率的差别,其下游工艺包含过滤澄清及TFF超滤。
在生物工艺流程中,需要使用核酸酶去除终产品中的核酸污染,而核酸酶作为外源成份,也需要在生产流程中去除。核酸酶去除工艺包括热灭活法、酶抑制剂、离子交换和亲合层析法等。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,包装了完整基因组DNA后的AAV病毒颗粒PI大致为5.9,来自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,M-SAN HQ中盐核酸酶pI 8.7左右。因此,在同样的条件下,从LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中盐核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更彻底。M-SAN HQ中盐核酸酶兼容常见细胞培养基,在多种培养基条件下去除核酸污染效率更高;

在干细胞医治领域, 某些疾病靠单纯的细胞替代并不能取得满意效果。利用逆转录病毒和慢病毒将外源目的基因整合到干细胞基因组,对基因功能缺失的遗传病具有良好疗效,但也存在一定致瘤风险。相比之下,CRISPR/Cas9基因编辑技术能够精确实现基因敲入、敲除及碱基修复。因此, 采用CRISPR/Cas9基因编辑技术对干细胞进行基因改造,不仅能够增加干细胞医治的疾病范围,也能更大程度地保证疗效的安全性。目前,CRISPR/Cas9在干细胞医治领域发挥着重要作用,同时更多由CRISPR/Cas9编辑的干细胞药物正在开发中。M-SAN HQ ELISA kit具有高精确度及高准确度。福建M-SAN HQ中盐核酸酶70950-160
M-SAN HQ中盐核酸酶更适合细胞基因drug(如AAV、LVV、RV及OV等)的生产。广东ArcticZymes中盐核酸酶70950-160
基因药物是指将外源基因引入靶细胞,纠正或补偿基因缺陷或异常引起的疾病的。这种策略对许多疾病的康复有很大的潜力,包括ai症、神经退行性疾病和心血管疾病。目前已经进行了2000多项基因药物临床试验,大多数载体已被证明是有效和安全的。目前的研究表明,大约64%的基因药物临床试验是为了医治ai症疾病,而最常见的策略是传递抑制cancer生长或杀死cancer的基因。基因药物的关键是使用安全有效的基因传递载体,如病毒载体和非病毒载体。病毒载体是常用的基因导入的方式之一。而腺病毒的载体由于转基因效率高,不受靶细胞是否分裂的限制,容易制备高滴度的病毒载体,在基因药物和免疫领域有更多的应用。广东ArcticZymes中盐核酸酶70950-160
宿主细胞DNA(HCD)残留以染色质形式存在,其中有带负电荷的DNA、带正电荷及疏水区段的组蛋白,就...
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【详情】ArcticZymes Technologies推出了SAN HQ高盐核酸酶和M-SAN HQ中盐核...
【详情】慢病毒载体既可以转导分裂细胞也可以转导非分裂细胞,被认为是安全的,并且可以提供长期的转基因表达,是目...
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