与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖:糖基化往往是异质的,这使得对高度糖基化的生物zhiliao药物的分析具有挑战性。完整质量数的确认以及其他产品质量属性的表征受到不同糖型复杂性的阻碍,这就是为什么有效的聚糖去除工具简化了此类分析的原因。 虽然 N-聚糖包含一个共同的结构,并且可以通过 PNGase F 整体去除,但粘蛋白型 O-聚糖在结构上更加多样化,具有多个不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物,能够依次分解O-聚糖,以完全去除最常见的O-聚糖结构(二唾液酸和单唾液酸基he心1和Tn抗原)。GalNAcEXO 是一种 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶,可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 残基。北京冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶

Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体:唾液酸是带负电荷的糖残基,存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化,从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. 样品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法,可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。广东冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究GalactEXO混合物由两种半乳糖苷酶组成,可高效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖酶。

Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶(O-糖苷酶),可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖,用于糖分析、确认 O-糖的存在和降低样品的异质性。Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶(内切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶),可催化来自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸,因此,由唾液酸酶混合物组成的唾液酸冻干,用于去除α2-3,α2-6和α2-8连接的唾液酸,与OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下获得良好活性。
Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱,用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体,开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来,该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,将很难分析,但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗体;

当在完整状态下进行分析时,EPO的聚糖异质性导致了非常复杂的质谱图。通过在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时,可以有效地去除 N 糖(含有PNGase F酶)和 O-糖,如对应于未修饰蛋白质的单个峰所示。EPO上残留了少量用乙酰化唾液酸修饰的O-聚糖,因为OmniGLYZOR对这种结构的水解效率低下。根据制造商Genvois的建议(在37°C下进行O/N孵育),两种底物蛋白也用另一种市售的去糖基化产物处理,并显示数据以供比较。另一方面,N-聚糖在内质网中翻译地连接到未折叠的蛋白质上。这导致某些 N-糖基化位点难以被 Genovis的PNGase F 接近,或者一旦底物蛋白折叠成其天然状态,就根本无法接近。因此,这种N-聚糖的水解需要底物蛋白以与酶活性相容的方式变性。将OglyZOR酶与依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或没有 SialEXO 孵育 1 小时。江苏冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
使用OpeRATOR对胞生成素(EPO)进行O-糖位点特异性消化:确定中级水平的 O-糖基化位点。北京冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶
在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截断O-聚糖后,在质谱图中观察到几个与GalNAcs相关的峰。为了去除剩余的GalNAc残基,应用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO处理后观察到的单个蛋白峰显示完全去除剩余的GalNAcs。 GalNAcEXO在生理缓冲液和中性pH值中具有活性,使其与大多数样品相容。此外,GalNAcEXO的活性不依赖于任何可能影响LC-MS分析的辅因子,如BSA。根据底物的性质,糖蛋白的GalNAcEXO反应在2小时内完成,而更复杂的样品可能需要孵育过夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在离心柱中,以便快速方便地处理样品,在制备过程中不会残留酶。北京冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶
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