用二代测序对样本进行宏病毒组测序具有的挑战:二代测序技术基本流程是核酸纯化-文库构建-生物信息学分析。用二代测序对样本进行宏病毒组测序,每一步都是很大的挑战。无论是来自肠道还是水体或者土壤,样本都会伴随基因组数倍于病毒的细菌和宿主细胞。为了提高数据有效利用率,首先,样本处理和核酸纯化需要有的放矢。文库构建时,由于病毒基因组核酸存在多种可能,建库成本的把控、文库保真度、建库成功率对于生产者和研究者都是极大的挑战。而生信分析,由于病毒并不像细菌一样研究透彻,具备庞大的数据库,目前国内外的分析水平也是参差不齐。随着医学微生物学研究技术的不断发展,病原学诊断已不再局限于病原体水平。河南水体微生物多样性分析诊断
目前构建的病毒宏基因组学文库主要有载体克隆文库和基于高通量测序技术的加接头的文库。随着深度测序技术的不断发展,第二代高通量测序技术、第三代单分子测序技术已经普遍地应用于各项研究领域中,以454测序技术和Illumina测序技术为表示的二代测序法得到迅速推广用于构建病毒宏基因组文库,相信将来第三代测序平台如tSMSTM(truesinglemolecularsequeneing)技术平台、SMRT(singlemoleculereal-time)技术平台、FRET测序技术及纳米孔单分子技术为表示的第三代测序法也将应用于构建病毒宏基因组文库。Donaldson等[23]采用高通量测序技术构建了蝙蝠肠道的病毒宏基因组学文库,获得了600000条读长(Reads)的核酸序列。广州口腔微生物多样性测序微生物的检测可以通过显微镜直接观察。
宏病毒组其实就是病毒的宏基因组(meta-genomics),该技术是随着高通量测序技术的兴起而发展起来的。该技术主要是使用大量微生物群体样本的测序数据和生物信息学分析手段,以多种数据库为基础,进行群体的种类和功能分析。因此,它主要的应用场景在于微生物群体研究,如肠道微生物、皮肤微生物、口腔微生物、水体微生物、土壤微生物等。一直以来宏基因组技术都是在细菌领域使用,病毒的样本收集困难、文库构建繁琐、数据库不完善,因此宏基因组技术未能获得普遍应用。上海探普生物科技有限公司立志专门解决病毒方向的基因组研究难题,开发了整套的样本处理和生信分析流程,基于这套流程,研究者们想对样本进行宏病毒组测序就很容易实现了。
基因测序技术在此次中起到了至关重要的作用,我国科研单位在一个月之内迅速发现了正确的致病病毒并完成测序,得到了WHO的赞许。我国科学研究者对病毒序列、变异、核酸检测手段的分享也为全世界应对COVID-19带来了极有力的支持。在病毒检测过程中,一种测序技术获得了市场的普遍关注,这个技术就是宏基因组测序(mNGS)技术。宏基因组学(Metagenomics),是以特定环境样品中整个微生物群落基因组作为研究对象,无需分离培养,直接提取环境样本的DNA进行高通量测序。对于临床而言,mNGS可以准确的分析患者样本全部微生物,这一点对于传染性疾病的病原体研究具有极高的应用价值。全基因组测序通过运用新一代高通量DNA测序仪,进行10到20倍覆盖率的个人全基因组测序。
人类想要征服新发人畜共患病,只有提前发掘潜在的新的致病的病原,并针对新病原进行基因组分析、流行病学调查、疫苗和抗体的开发等方面的研究。病毒宏基因组学是在宏基因组学基础上发展起来研究特定环境中病毒的新兴技术,该技术结合深度测序技术(第二代、第三代测序技术)已经在人类、动物、特定环境中挖掘出大量的新病毒,该技术不依赖于病毒培养及病毒序列,在国内外被普遍应用于新发人畜共患病病原的挖掘与临床诊断。总之,随着病毒宏基因组学与各种新的分子生物学技术及深度测序技术的结合,该技术展现了区别于传统病毒诊断技术的优势,而该技术对动物病毒的挖掘及其他领域的应用将更加普遍。可以通过控制微生物的生长环境来判断微生物的种属类型。河南水体微生物多样性分析诊断
病毒是一种非细胞生命形态,它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成。河南水体微生物多样性分析诊断
宏基因组是指特定环境中全部微生物遗传物质的总和,宏基因组测序以特定环境中的整个微生物群落作为研究的对象,不需对微生物进行分离培养,而是提取环境微生物总DNA进行研究。其摆脱了传统研究中微生物分离培养的技术限制,在基因组水平解读微生物群体的多样性和丰度,探索微生物与环境及宿主之间的关系。目前,第二代高通量测序技术在宏基因组的研究上已被普遍应用。第二代高通量测序平台具有通量高、准确性高、速度快、信息全等特点,加快了宏基因组测序在鉴定低丰度的微生物群落,挖掘更多基因资源方面的应用。河南水体微生物多样性分析诊断
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