酵母氨基酸缺陷型合成液体培养基（色氨酸/尿嘧啶缺陷）

培养细胞时应使用5%还是10%CO2，或者根本没有影响？一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用：培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度（5%） ，与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，从而调节培养基的PH值。NEAA：非必须氨基酸，NEAA（非必需氨基酸） 是含几种非必需氨基酸的合剂，添加到的原培养基不同，NEAA 也有不同的种类，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。生长细胞需要的营养物质包括碳源、氮源、微量元素和维生素等。酵母氨基酸缺陷型合成液体培养基（色氨酸/尿嘧啶缺陷）

HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks′液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液，如果只是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：新配的培养基在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时，溶液的pH 还会向上浮动0.2左右。SH培养基含血清培养基是一种以动物血清为主的培养基普遍用于诱导细胞分化和胚胎发育研究等方面。

培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的较适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。值得注意的是，在微生物生长繁殖和代谢过程中，由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累，会导致培养基pH发生变化，若不对培养基pH条件进行控制，往往导致微生物生长速度下降或（和）代谢产物产量下降。因此，为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐（如KH2PO4和K2HPO4）组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性，KH2PO4溶液呈酸性，两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时，H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物，培养基pH不会过度降低；如果培养基中OH-浓度增加，OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物，培养基pH也不会过度升高。

长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子（特别是钙、镁、铁离子）结合形成难溶性复合物而产生沉淀，因此，在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时，常需在培养基中加入少量螯合剂，避免培养基中产生沉淀，常用的螯合剂为乙二胺四乙酸（EDTA）。还可以将含钙、镁、铁等离子的成分与磷酸盐、碳酸盐分别进行灭菌，然后再混合，避免形成沉淀；高压蒸汽灭菌后，培养基pH会发生改变（一般使pH降低），可根据所培养微生物的要求，在培养基灭菌前后加以调整。培养基是一种供养分离的微生物和生物样品的营养物质基质。

培养基按成分分类有哪些？按形态分类：培养基按其不同的物理状态，可分为液体、流体、半固体和固体4类，培养基的物理状态取决于培养基中是否加人凝固剂或凝固剂的加入量。1、液体培养基(liquidnutrientmedium)不加任何凝固剂，常温下以完全液态存在的培养基，如肉汤培养基或一般液体增菌培养基。2、流体培养基(semi-liquidmedium)在液体培养基中加入0.05%~0.1%的琼脂粉，使其具一定黏度，即成流体培养基。加入琼脂粉增加了培养基的黏度，降低空气中的氧气进人培养基的速度，能使培养基保持较长时间的厌氧条件，有利于一般厌氧菌的生长繁殖，如硫乙醇酸盐培养基、改良马丁培养基等。一般用于霉菌和厌氧菌检查的液体培养基中可加人少量琼脂使其成为流体培养。微生物的供能方式会影响它对营养物质的利用，因此不同微生物需要不同成分的培养基。巴氏芽孢杆菌固体培养基

自制培养基需要小心配比，防止成分误差或者污染。酵母氨基酸缺陷型合成液体培养基（色氨酸/尿嘧啶缺陷）

按培养基的营养成分是否完全区分：1.基本培养基，亦称“较低限度培养基”。只能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，称为基本培养基，是含有营养要求较低成分的合成培养基，常用“[-]”表示。这种培养基往往缺少某些生长因子，所以经过诱变过的营养缺陷型菌株不能生长。2.完全培养基，基础培养基添加血清等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。完全培养基可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要，常以“[+]”表示。3.补充培养基，凡是只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组合培养基，称为补充培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成的。根据在基本培养基中加入的是A或B等营养因子代谢物而分别用[A]或[B]等来表示。酵母氨基酸缺陷型合成液体培养基（色氨酸/尿嘧啶缺陷）

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