选择性改良NPNL培养基添加剂1

在培养基中加入 HEPES 有何好处?培养基中常用的缓冲体系是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理 pH 条件下会降低缓冲能力。而HEPES 是一种很强的缓冲剂，能使细胞培养基在 pH7.2-7.6 条件下缓冲能力增强。HEPES溶液：是一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境，CO2 气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。神经细胞原代培养的过程中能用到。培养基是细胞和微生物生长所需的基本营养物质和环境条件。选择性改良NPNL培养基添加剂1

培养基的种类有哪些？鉴别培养基：利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-亚甲蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。选择培养基：在培养基中加入抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于所选择的细菌种类的生长。例如培养肠道致病菌的SS琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到。麦康凯琼脂基础培养基的pH值需要根据不同微生物的生长适应范围进行调节。

动物细胞培养必需的溶液，平衡盐水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羟乙基哌嗪乙烷磺酸）细胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液。1)青、链霉素，每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素。2)卡那霉素：终浓度为50ug/ml培养液。3）制霉菌素：浓度25U/ml，小瓶分装，每瓶一次用完。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清，前者来源少，价格高；后者要求刚产下尚未哺乳的小牛，因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。

培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的较适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。值得注意的是，在微生物生长繁殖和代谢过程中，由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累，会导致培养基pH发生变化，若不对培养基pH条件进行控制，往往导致微生物生长速度下降或（和）代谢产物产量下降。因此，为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐（如KH2PO4和K2HPO4）组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性，KH2PO4溶液呈酸性，两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时，H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物，培养基pH不会过度降低；如果培养基中OH-浓度增加，OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物，培养基pH也不会过度升高。培养基根据功能分为选择性培养基、区分性培养基、富集培养基等。

培养基的分类有几种呢？按培养基组成物质的化学成分区分：1.天然培养基，天然培养基是指一类利用动物、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。例如。牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基和LB培养基等。2.组合培养基，合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计而配制的培养基。例如。高氏1号培养基和查氏培养基等。3.半组合培养基 ，指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如，马铃薯蔗糖培养基。培养基应适合不同类型细菌的生长，包括需氧菌和厌氧菌。Schaedler肉汤

LB培养基是普遍使用的通用培养基，适用于大多数肠道菌和非肠道菌的培养。选择性改良NPNL培养基添加剂1

通常用心、脑或其他脏器浸液配制厌氧菌培养基，并常需加入硫乙醇酸钠、半胱氨酸、肉渣、还原铁、活性炭等还原剂或除氧材料。在液体培养基中还可加入刃天青或亚甲基蓝作为氧化还原指示剂，以观察培养基的含氧程度。心、脑浸液、肝块、肉渣中含有不饱和脂肪酸，能吸收培养基中的氧。硫乙醇酸钠、半胱氨酸是较强的还原剂，能消耗溶解在培养基中的氧。干燥的活性炭和脱脂棉同样能吸收培养基中的氧。所以培养基中加入还原剂和吸收材料，目的都是为造成培养基的缺氧环境，使培养基保持较低的氧化还原电势。此外，还可在培养基表面加一层液体石蜡，以隔绝培养基与大气的接触。选择性改良NPNL培养基添加剂1

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