培养基配制:配制用水,培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基:培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清:培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。培养基的分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。黑龙江培养基制备器价格
微生物检验培养基制备的要点:培养基灭菌处理:分装完成的培养基应马上灭菌。其杀毒灭菌方式主要有三种类型:高压蒸汽灭菌方式,此方法可用于大多数耐热培养基。对于小份:使用121°C十五分钟;大份:121°C三十分钟;对于含碳水化合物的中.海培养基,需113~115°C十五分钟。灭菌以避免糖分的破坏。煮沸灭菌法方式,此方法可用于含有不耐高温物质的培养基。过滤除菌方式,过滤除菌,采用无菌技术定量添加培养基。血液和可以用无菌技术抽取并加入冷却至约五十度的培养基中。当中'海培养基中含有不耐热物质时可以使用此方法。广东进口培养基制备器培养基制备器完全称取完毕后,还应进行一次检查。
实验室在制作培养基时候的经验总结:培养基分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时较好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时,分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为恰当。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中,随该批培养基同时灭菌,以为测定该批培养基较终pH之用。
对LST(月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤)培养基进行灭菌时,有时发酵管内会有气泡。为防止发酵管内产生气泡,可以采取以下几项措施:(1)小倒管浸满培养基(不留气泡)后再加入到盛LST的试管中。(2)灭菌锅关闭放气阀前,将锅内气体排干净。(3)试管塞不要塞得太紧(使用硅胶塞的时候),勿使用橡皮塞。(4)不要过早打开灭菌锅,要等灭菌锅内气体和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。如果以上情况都做到还有气泡,可用水做培养基组的对照试验,若培养基组有气泡,而对照组没有气泡,可确定是培养基自身的原因。天然培养基是指一类利用动物、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。
培养基制备基本方法:培养基成分的称取,培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱,很好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方上做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。完全称取完毕后,还应进行一次检查。培养基的制备记录,每次制备培养基均应有记录,包括培养基名称,配方及其来源,和各种成份的牌号。很终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等,记录应复制一份,原记录保存备查,复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。全自动培养基制备仪主要特点:仪器盖设计保护锁,超过100度自动加锁,使实验环境更安全。山西培养基制备器哪个品牌好
制备培养基的操作要点:半固体培养基如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中,就制成了半固体培养基。黑龙江培养基制备器价格
制作斜面培养基和平板培养基:培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5-1米左右的木条,厚度为1厘米左右,将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基末长杂菌,即可用来培养微生物。黑龙江培养基制备器价格
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