培养基制备技术:一、玻璃器皿的清洗:在制备培养基的过程中,首先要使用一些玻璃器皿,如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。1、新购的玻璃器皿:除去包装沾染的污垢后,先用热肥皂水刷洗,流水冲净,再浸泡于1~2%的工业盐酸中数小时,使游离的碱性物质除去,再以流水冲净。对容量较大的器皿,如大烧瓶、量筒等,洗净后注入浓盐酸少许,转动容器使其内部表面均沾有盐酸,数分钟后倾去盐酸,再以流水冲净,倒置于洗涤架上将水空干,即可使用。2、用过的玻璃器皿:凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿,使用后可随时冲洗,吸取过化学试剂的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必须经过适当消毒后,将污垢除去,用皂液洗刷,再用流水冲洗干净。全自动培养基制备仪主要特点:力搅拌,确保培养基受热均匀,营养均一。重庆培养基制备器供应商
培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化.也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动,以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化.迄至煮沸。如为琼脂培养基,应先用一部分水将琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,较后必须加以补足。贵州培养基消毒 培养基制备器配制培养基的原则:根据培养目的需要选择适宜的营养物质。
微生物限度:细胞培养基不是无菌产品,其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖,导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中细菌和霉菌,是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华人民当地药典》2005版二部附录第100页的口服给药制剂的微生物限度标准,并严于该标准,规定细胞培养基产品的细菌数每1g不得超过200个,霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1g,加入无菌纯化水10mL溶解,混匀即得试样。按中华人民当地药典2005年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法进行,检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。
杀毒灭菌方式主要有三种类型:⑴高压蒸汽灭菌方式,此方法可用于大多数耐热培养基。⑵煮沸灭菌法方式:此方法可用于含有不耐高温物质的培养基。⑶过滤除菌方式:过滤除菌,采用无菌技术定量添加培养基。血液和可以用无菌技术抽取并加入冷却至约五十度的培养基中。当培养基中含有不耐热物质时可以使用此方法。培养基倒入平板:将灭菌溶化的培养基冷却至五十度后,倒入无菌干燥的培养皿中。微生物培养基制备的温度不能太高,否则培养皿内盖容易形成过多的冷凝水。培养基制备器都是微处理器控制的,而且灭菌之后保持的温度是可以预设的。
培养基的过滤澄清:液体培养基必须较全澄清,琼脂培养基也应透明无明显沉淀,因此,须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应拆叠成折扇成漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去,再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55-60℃的培养基放入大的三角烧瓶内,装入量不得超过烧瓶容量的1/2,每1000ml培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白.强力振摇3-5分钟,置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。海南琼脂培养基制备器
培养基的灭菌:一般培养基可采用121°C高压蒸汽灭菌15分钟的方法。重庆培养基制备器供应商
培养基配置原则:控制pH条件,当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时,H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物,培养基pH不会过度降低;如果培养基中OH-浓度增加,OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基pH也不会过度升高。但KH2PO4和K2HPO4缓冲系统只能在一定的pH范围内(6.4-7.2)起调节作用。有些微生物,如乳酸菌能大量产酸,上述缓冲系统就难以起到缓冲作用,此时可在培养基中添加难溶的碳酸盐(如CaCO3)来进行调节,CaCO3难溶于水,不会使培养基pH过度升高,但它可以不断中和微生物产生的酸,同时释放出CO2,将培养基pH控制在一定范围内。在培养基中还存在一些天然的缓冲系统,如氨基酸、肽、蛋白质都属于两性电解质,也可起到缓冲剂的作用。重庆培养基制备器供应商
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