常用培养基的制备及注意事项一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用较普遍和较普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的较基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。浙江培养基制备器供应商
微生物检验培养基制备的要点：培养基溶化，将中海培养基纳入烧杯容器中，加小适量的水，缓慢加水并用玻璃棒小幅度搅拌。倘若培养基中不含琼脂，则不需要对培养基加热；相反含有琼脂，就需要用本生灯/电磁炉加热煮沸。待培养基完全溶解后再加入适量的水搅拌均匀。如准备的北京中海培养基较多，在不锈钢锅中融化加热，可以用温水加热，需不停搅拌，防止焦化。如果不小心出现焦化现象，则制备好的培养基将无法使用，必须重新配制中海生物培养基。不要使用铜或铁容器溶解制备培养基，因为铜或铁容器可能会导致容器内培养基中铜、铁超标，影响实验结果，其中培养基中铜含量大于0.3毫克每升，细菌不适宜生长。铁含量超过0.14毫克每升，防止细菌产生有毒的。容易发生反应和沉淀的药物应单独溶解，然后加入培养基中，如磷酸氢二钾和硫酸镁。天津培养基制备器供应商半固体培养基，指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。
培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现医学，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下：1.液体培养基：液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白（1000ml培养基用1个鸡蛋白）在100℃加热后保持60～70℃，40～60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。2.固体培养基：如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤；亦可用自然沉淀法，即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内，以高压（103.43kPa）蒸汽融化15分钟后，静置高压锅内过夜，次日将琼脂倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的琼脂培养基。
配制好的培养基保存：灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量，应该是在较长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保存;倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完，应于冷藏保存，如果保存时间超过2天，应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期，应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。培养基一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。
微生物检验培养基制备的要点：培养基倒入平板，将灭菌溶化的培养基冷却至五十度后，倒入无菌干燥的培养皿中。微生物培养基制备的温度不能太高，否则培养皿内盖容易形成过多的冷凝水；温度太低，中海培养基容易凝固成块状，不能做成平板。倒平板时，要靠近酒精的火焰以防止外来细菌落入盘中。左手托住培养皿，右手托住三角瓶底部。用小指和手掌拉出锥形瓶的棉塞，烧灼烧瓶口，用拇指和食指在培养皿盖上打开一条缝，直到烧瓶口刚好伸手进去，倒入培养基，直到底部被覆盖。不要超过培养皿高度的三分之一，迅速盖上盖子，放在桌子上，轻轻旋转培养皿，使培养基分布均匀，凝结后即可。要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质，配制针对性强的培养基。天津培养基制备器供应商
组合培养基是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。浙江培养基制备器供应商
在制备培养基时，通常要考虑以下因素：(1)pH值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长*pH值变化很小，但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4～7.7，转化细胞以pH=7.0～7.4更合适。据报道，上皮细胞以pH=5.5合适。为确定*佳pH值，做一个简单的生长实验或特殊功能分析酚红常用作指示剂，pH=7.4呈红色，pH=7.0变橙色，pH=6.5变黄色，而pH=7.6呈红色中略带蓝色，pH=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性，因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样，放在与制备培养基相同的瓶子中。(2)缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用，因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围，一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基，可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。浙江培养基制备器供应商
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