在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。要100度以上，也就是对应压力下的沸点后才能使水剧烈沸腾，将锅内空气更多的排除。使用高压蒸汽灭菌锅包裹不应过大、过紧。山西双扉灭菌锅
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 使用方法：检查锅内蒸馏水量是否充足，检查个个阀门及开关是否工作正常。将待灭菌的物品用一层牛皮纸或两层报纸包好，一定要包完整！放入锅内，物与物之间一定要有空隙。盖好锅盖，螺母对称拧紧，打开放气阀，关闭安全阀。打开电源观察放气阀是否有蒸汽流出，确定后关闭放气阀，待压力表到达0.1-0.15kpa（温度121℃左右）时计时，15-30分钟，关闭开关。待压力表指针归零后，打开放气阀，按对称方式打开锅盖，取出物品。注意事项:锅内水必须用蒸馏水或纯化水锅盖螺母必须对称拧紧。一定要在放气阀出大量蒸汽在关闭。当灭菌时间结束时，必须等到压力表归零在打开。灭菌锅超过大耐受压力后，放气阀会自动弹开，此时锅内物品不能保证灭菌完全，需从新灭菌。上海高温高压蒸汽灭菌锅当高压灭菌锅处于灭菌状态时，需要通过数据采集器对温度数据进行采集。
高压灭菌锅的操作：拿出上面的篮子，向里面加RO水/单蒸水，使水位线至少超过下面篮子底部（如果里面有水，需检查水位，并保证水没有被污染，否则要将水排掉，重新换过）；然后将要灭菌的东西放入篮子里，再慢慢的把篮子放入锅内，盖上盖子，顺时针旋紧排气阀。；插上电源，打开开关，控制盘灯会亮起，准备操作。按MODEL键选择你所需要的操作模型。（如有需要，选择你所需要的时间和温度）。按START键，开始灭菌。(升温过程缓慢，不同的模式也不同，大约在30min左右)。当设置的时间到的时候，仪器会连响三下，当温度降到97℃的时候，仪器要连响六下，当温度下降到60℃的时候，仪器要响十下，整个灭菌过程完成。（大概要一个小时左右）。让高压灭菌锅的压强降到0，温度要降到80℃以下，然后按STOP键，停止操作，此时已将自动转到制冷系统，然后关掉开关，切掉电源。打开盖子，将灭好菌的东西拿出来，再将盖子盖好。排水，待水充分冷却后，打开位于前面的排水管，排水后关闭排水管。
高压灭菌锅的灭菌步骤：准备。将高压灭菌锅放在2000瓦电炉上，或放在有足够火力的煤气灶、煤炉上，向锅内加水至水位标记线为止。将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅内套层中，物品放置不宜过多，过挤，锅内应留出三分之一空间。然后盖严锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，关闭锅盖上的气阀。加热。点燃热源，开始加热。当锅盖上的压力表达到0.5kg/c㎡时，打开放气阀，排净锅内冷空气，直到压力表回降到“0”时，关闭气阀，继续加热。当压力表上升到所需压力时（一般为1kg/c㎡），开始计算灭菌时间。此时应适当关小热源，不断调节热源大小，使压力始终维持在所需数值上，达到保压时间后，停止加热，使高压灭菌锅内压力自然下降。结束。待压力表降至“0”时，拧松螺旋，半开锅盖，用锅内余热烘干盖纸，10分钟后取出灭菌物品。高压蒸汽灭菌锅的使用方法：加水、堆放、密封、设定灭菌温度及时间、加热、灭菌、结束。
高压灭菌锅不能正常地工作的原因之一:大量样本加样时吸空报警：产生原因可能（maybe)是加样针、试管壁、样品杯壁带静电（是一种处于静止状态的电荷）时，可导致(cause)加样针吸空报警(Callthepolice)；水的电导率超标，可同时致加样针移动(mobile)故障（fault）报警或加样吸空报警；纯水机声音异常，废水管排量低为反渗膜损害等。高压灭菌器是用比常压高的压力，把水的沸点升100℃以上的高温，而进行液体或器具灭菌的一种高压容器。高压消毒灭菌锅进行火菌处理后，可通过生物学监测的方法查看灭菌效果。江苏药包材测试灭菌锅
双层杀菌锅上罐是热水罐，下罐是处理罐，上罐的热水重复使用，可节约大量蒸汽。山西双扉灭菌锅
灭菌操作程序：开盖操作达到灭菌时间后即可切断电源，一般当压力表的压力降至0之后，再打开排气阀。有时，在压力降到0.05MPa，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后才能开盖，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。取出培养基摆在平台上以待冷凝，不可以长久不取出，否则容易引起培养基成分变化以至无法制作斜面培养基。如果因为久不放气导致锅炉内产生负压、盖子打不开，可以将放气阀打开，让空气进入，内外压力平衡后盖子就可以打开了。取无菌物品时，要严格无菌操作。同时应分类放置，顺序发放取用。山西双扉灭菌锅
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