易操作原代细胞和细胞系的比较3.原代细胞的应用由于原代细胞生物学特性未发生很大改变，接近和反映体内生长特性，因此是：(1)研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的工具；(2)更好实现医诊治模式，实现个体化用药的目的。第二部分：原代细胞分离和培养技术原代培养的原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶/胶原酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。主要包括取材——分离——培养等3部分；在原代细胞应用较多的包括：组织（如实体瘤、皮肤等）、悬浮细胞的取材等。下面依次介绍：一、组织的取材病人自体的原代细胞由于更接近临床患者标本，可以更好实现医疗的诊治模式，实现个体化用药的目的。所以对病人自体细胞体外分离与培养十分必要。基本过程如下图所示：原代细胞的分离步骤备注：上图细胞为肉瘤患者的原代细胞具体步骤如下：1.在无菌条件下的冰上对新鲜离体的组织，剔除包膜及坏死组织，无菌PBS清洗3-5次；切成约1mm3组织块；2.加入2mmol的EDTA，摇匀后放置冰上约30-60min；3.离心，并加入胶原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期间，置于37°培养箱。脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。湖南组织原代细胞构建
同时解决了植物细胞对水、营养物、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。[2]微生物细胞培养微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂，因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度，而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻，玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等成为良好的微生物天然培养基。对于一些特殊微生物的营养条件要求，可以在这些天然培养基的基础上额外添加。[2]细胞培养环境及条件编辑细胞培养环境因素1．无菌环境无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在内，系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。常见的微生物污染有支原体、细菌。支原体无致死毒性，可与细胞长期共存，对细胞有潜在影响，但体积小，不易鉴别，可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快。宁夏乳鼠原代细胞购买2~4h后轻轻翻转培养皿,补足培液使肌小粒浸浴于培养液中，3d换液一次,待细胞长满即可传代。
下面是它所需要的特殊条件。⑴血清：动物细胞离体培养常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如微量元素、矿物质和脂肪。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，塑料等作为支持物。⑶气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件。[2]植物细胞培养⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如药物的过程，植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。⑵植物细胞的分裂和生长特别需要植物的调节，促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是基本的。植物细胞的分裂，生长，分化和个体生长周期都有相应的参与调节。和动物细胞相比，植物细胞离体培养对要求的原理已经了解，其应用技术也已相当成熟，已经有一套能使用的培养液。
经过长时间、连续的传代培养后，细胞系随着代数的增加，细胞的基因型和表型都有可能发生改变。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群，除非细胞经过了遗传改造。2、倍增和代数有什么区别？倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。3、接收到的冻存细胞该如何处理？收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快，以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。4、冻存的细胞该如何开始培养？(1)将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。(2)将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。(3)将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。(4)用70％的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。(5)打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹（注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象）。(6)用多聚赖氨酸（或参照说明书）包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。。脐静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展。
导语对于大部分科研人员来说，研究中一般用到均是现成的细胞系/株，我们只需要：进行细胞传代和保种。然而，这些细胞系常常由于体外长期培养，而丢失原有生物学特性，对药物处理的反应差距越来越大。因此，原代细胞的地位日渐凸显，Paper中若有了原代细胞的数据都会添色不少。然而，就小编亲生经历，原代细胞分离着实是个技术活，我们就结合自身经验，为大家介绍：组织和正常组织的原代细胞的分离与培养方法。部分：原代细胞的基本知识1.什么是原代细胞培养?原代细胞（Primarycells）：是指直接从机体取出的组织或细胞获得单个细胞并在体外进行培养的细胞。这里的组织主要指：组织、外周血及胚胎等。原代细胞培养：由于原代细胞生长缓慢，繁殖一定的代数停止生长（一般10代以内）。所以一般认为：培养的原代的第1和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。2.原代细胞与细胞系（celllines）的区别原代细胞和细胞系的比较：PrimarycellsCelllines增殖能力较弱强繁殖代数一般只能传10代以内无限增殖，50代左右遗传物质完整性遗传物质未改变遗传物质发生改变生物特性接近临床样本偏离临床样本培养容易程度比较复杂简单。多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长。宁夏乳鼠原代细胞购买
为了后续实验成功进行，我们对分离培养的细胞做一个细胞鉴定实验。湖南组织原代细胞构建
原代细胞的优势与不足细胞培养很好的补充了体内实验的不足，它让细胞功能和进程的研究更具可操作性。细胞系的一个缺点是它们往往与原始的组织有不一样的遗传和表型。相比之下，原代细胞保持了细胞在体内的许多重要标志和功能。原代细胞的生长：虽然原代细胞有诸多优点，但是获得高纯度的原代细胞是一个非常艰巨的过程。比起细胞系，原代细胞可谓是极其敏感，需要额外添加经典培养基所没有的营养。原代细胞要在专为每种细胞定制的特殊培养液中存活和生长。例如内皮细胞与上皮细胞或神经元营养需求就大为不同。因此需要特殊培养基。传统细胞培养基靠血清提供生长因子、脂类和其他未知成分供细胞生长。但高血清会导致原代细胞分化或助长成纤维细胞等污染。此外，使用血清还会顾虑费用增高和批次差异等问题。使用低血清或无血清的特殊成分培养基不仅可以避开这些问题，还能更好的促进原代细胞的生长。另外，将原代细胞接种在生理亲和性的基板上可以显著提高细胞贴壁率、生长状态和纯度。基因表达分析：基因表达直接影响细胞功能，基因表达分析对研究原代细胞起重要作用。传统的报告基因检测和cDNA芯片方法往往需要转染或大量高质量RNA。但是原代细胞是出了名的难转染。湖南组织原代细胞构建
