腹水外泌体质谱

外泌体特指直径在30-150nm的囊泡，其主要来源于细胞内多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9）、热休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示踪病毒使用CD9作为生物标记，通过将CD9与荧光蛋白偶联，带荧光的膜蛋白会在表达至外泌体膜上，便于后续进行、观察内化或其他实验。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有ganran力的病毒颗粒，通过ganran细胞或组织，实现外源基因在细胞或组织中表达。外泌体与各种疾病的相关性被检测出，特别是血液中释放的病细胞来源的外泌体。腹水外泌体质谱

目前市面上开发的外泌体提取试剂盒，是根据外泌体表面由类似于细胞膜的脂质双分子层具有一定疏水性这一特性，用试剂捆绑水分子，从而可通过常规离心收集沉淀获取外泌体。这种快速提取外泌体的方法虽简便快捷、样本需求少、对设备要求低，但与差速离心方法类似，其分离得到的沉淀包含其他细胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分复杂，很可能掺杂一些未知的疏水大分子物质。Sabapatha等曾根据来源于胎盘的外泌体表面特异表达这一特性，使用耦合到磁珠的抗抗体，采用磁珠分选方法分离血浆中胎盘来源外泌体。此法可以提取的胎盘外泌体量少，不适用于大规模提取制备，且免疫磁珠价格昂贵，不利于提取技术的普及。组织外泌体荧光标记外泌体的检测和提取还遇到一个困难即：对各种外泌体的分类。

外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志，而且可作为天然的药物传递载体。外泌体能够负载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等，且在体液中宽泛分布且具有定向归巢能力。外泌体独特的生物兼容性、高稳定性、瘤靶向性使其在未来瘤治理中有很大的利用价值。外泌体能够装载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等。作为小分子化合物载体，外泌体装载姜黄素、紫杉醇、阿霉素等主要是用于抗瘤研究；已经发现外泌体可递送多种蛋白质，例如酶，细胞骨架蛋白质和跨膜蛋白质；外泌体作为核酸分子的药物载体主要用于基因治理，外泌体天然的可以携带遗传（例如miRNA，siRNA）到靶细胞中，从而在生物学和致病过程中诱导遗传修饰。

外泌体是细胞在特定条件下分泌的小囊泡，是细胞间传递信号，相互沟通和影响的重要工具，它可以直接进入受体细胞影响细胞功能。外泌体PK细胞因子：磷脂双层膜结构，可保护内容物，包含多种细胞因子可直接进入受体细胞。外泌体PK干细胞：无免疫排斥，体积小穿透力强，可避免伦理道德争议。年轻的脂肪组织中提取外泌体，在特定条件下扩大培养出具有调控毛发根部的囊干细胞功能的外泌体，包含多种细胞因子的外泌体直接进入毛发根部的囊细胞，恢复毛发根部的囊干细胞的正常功能。外泌体在体液中十分稳定，同时外囊泡所含的蛋白质和RNA被外泌体的脂质双层膜所包被也不会分解。

外泌体是具有双层脂膜的囊泡结构,其稳定性较好,可保护内部生物分子免受体液中各种酶的影响,从而保持其完整性和生物活性。外泌体被提取后一般悬浮于磷酸盐缓冲液。目前,常用的储存方法为冷冻保存,但是冷冻保存可能会导致外泌体形状与物理性质的改变,也可能导致多层囊泡的形成和聚集,反复冻融会导致外泌体表面分子的生物特性、含量和标志物组成发生变化。血清中包含外泌体在内的细胞外囊泡DNA在不同储存环境可保持稳定,血浆存放于4°C时其RNA会明显降解,在–20°C下长期保存也会导致血浆中外泌体总RNA降解,但miRNA却十分稳定,这也提示了外泌体miRNA作为生物标志物的潜力。免疫印迹法（WB）和Elisa检测法作为被普遍应用的外泌体检测的一般方法。腹水外泌体质谱

PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。腹水外泌体质谱

科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。例如，类风湿关节炎患者的滑膜成纤维细胞所释放的外泌体，高浓度集聚诱导细胞死亡的TNF-α，可使类风湿关节炎恶化。通过上述介绍可以知道症状细胞来源的外泌体含有与症状进展相关的分子，神经细胞来源的外泌体含有与神经退行性疾病相关的分子，因此，通过压制或去除这些外泌体，有希望压制疾病发生。随着今后的研究发展，外泌体功能逐步清晰，并扩大临床应用，有望将外泌体应用在各种疾病医治上。甚至可尝试利用外泌体将siRNA和抗药剂等运输到目标细胞中。腹水外泌体质谱