唾液外泌体lncRNA芯片

寻找肝脏疾病的新型分子标志物一直是研究热点，也是难点。不同肝脏疾病中，细胞分泌的外泌体所携带的核酸和蛋白组分之间存在差异。这些不同生理状态下外泌体所携带的特异性蛋白分子、miRNA等，是潜在的分子诊断和预后标志物。肝细胞患者中，血清外泌体miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明显上升，miR-101、-106b、-122和miR-195明显下降。而HCC患者肝移植复发后，血清外泌体miR-718水平明显下降。除外泌体外，微泡也有可能作为新型标志物，研究发现HCV患病者中CD4+和CD8+T细胞来源的微泡含量上升；而肝脏干细胞分泌的微泡中多种miRNAs上调。外泌体本身的惰性相当高，但它们与细胞膜融合可将所携带的物质和信号传递到受体细胞并改变其生物学功能。唾液外泌体lncRNA芯片

一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现于早期以及回收的核内体中，RAB7和RAB9主要出现于晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族、热休克蛋白家族。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶、核糖体蛋白（RPS3）、信号转导因子（黑色素瘤分化相关因子,ARF1,CDC42,人类红细胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子、细胞骨架蛋白以及泛素等。干细胞提取试剂盒应用外泌体主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。

外泌体的提取方法：免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度较高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。PS法可提取相当高纯度的外泌体。色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不宽泛。

外泌体运输的基因类药物也可以是miRNA，miRNA是一类非编码的内源性RNA，主要用于调节转录后的基因表达。miRNA主要通过与mRNA的未翻译的区域(UTRs)结合起到抑制基因表达和降解mRNA的作用。与siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表达不需要完美的碱基配对，因此每种miRNA可以抑制多种蛋白质的表达，而每种siRNA只针对一种蛋白质。miRNA的运载也存在着种种挑战:miRNA体内稳定性差、生物分布不理想、易被体内酶降解以及容易引起副反应等。越来越多的研究表明外泌体也是体内运载miRNA的优良载体，并且利用外泌体运输miRNA的zhiliao方法已经在许多疾病模型中得以应用。外泌体被包裹在坚硬的双层膜中，双层膜保护外泌体的内容物，使外泌体能够在组织中长距离移动。

建立记录各论文实验条件的数据库也可作为规避混乱的方法之一。一方面，随着EV研究倍受世界瞩目，各国启动了大型研究项目。美国启动NIH战略性大型项目（ExtracellularRNACommunication），国际厉害性学会——Gordon和KeystoneSymposia也从2016开始成立会议小组。受到欧洲药物研究开发公司“创新药物倡议组织（IMI）”的支持推进的CANCER-ID项目，也包含EV研究在内。2017年日本选定了EV研究为文部科学省研究开发战略的目标之一，期待会加速今后的研究发展。无论如何，今后EV研究的根本就是必须有强有力的研究方法和技术，而PS亲和法有望成为其中之一。外泌体是一种由活细胞分泌的，直径约为40～160nm的具有双层膜结构的生物活性囊泡。江西外泌体lncRNA芯片

从症状患者树突状细胞释放的外泌体中，含有各种症状细胞来源的蛋白质。唾液外泌体lncRNA芯片

为获得外泌体的大小、浓度、形态及蛋白质组成等信息，可以通过电镜、动态光散射、纳米颗粒跟踪分析仪、蛋白质免疫印迹、酶联免疫吸附法、流式细胞仪等对外泌体进行表征。通过电镜可获得外泌体的形态信息，不同类型的显微镜由于操作环境不同，得到的外泌体形态存在差异。例如，在扫描电镜、透射电镜和原子力显微镜中，外泌体呈现囊泡独有的茶托形，可能由于样品在固定或染色过程中极度脱水，导致外泌体塌陷所致。与之相反，在冷冻电镜中外泌体呈现圆形，由于不会脱水变性，所得的外泌体形态可能更加接近囊泡的真实状态。另外，由于透射电镜和原子力显微镜具有较高分辨率，也能够提供外泌体磷脂双分子层厚度、粒径分布等信息。唾液外泌体lncRNA芯片