外泌体原液

在利用外泌体运输PTX进行抗中流的研究中，由于间充质干细胞可以归巢(homing)至中流细胞微环境并且可以不通过基因操作即可对PTX运输，因此Pessina等采用间充质干细胞SR4987作为分泌外泌体的母代细胞，而后将SR4987与PTX共混，使SR4987分泌的外泌体含有PTX，再利用超速离心法将载有PTX的外泌体分离出来，研究其对体外人胰腺ai细胞株的影响。结果表明外泌体可以有效的运载PTX并不破坏其功能，小泡(主要指外泌体)溶液的蛋白质浓度在0.047～0.095mg/mL之间时可以诱导中流细胞凋亡50%，这种抑制效果与纯PTX对体外ai细胞的抑制效果相当。活内的外泌体动态（哪个外泌体迁移至何处）也会成为今后需要努力研究的重要课题。外泌体原液

已经有许多关于外泌体作用的报导，根据这些现象实验中，从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体，在活内是否真的能发生作用尚未能确定。确认外泌体生理作用的单独方法就是明确外泌体的释放机制，通过促进或压制释放机制，分析会引起何种生理作用，这是进一步研究的发展方向。甚至活内的外泌体动态（哪个外泌体迁移至何处）也会成为今后需要努力研究的重要课题。实际上，用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体，其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较，PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上，几乎没有混入外泌体以外的蛋白，回收量高，操作重复性好。细胞上清外泌体Dir外泌体又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。

密度梯度离心是基于差速超高速离心的改良技术。该方法需预先利用常用的梯度液介质如蔗糖、碘克沙醇和氯化铯等，在离心管中构筑从底部到顶部密度逐渐降低的密度梯度带。根据密度梯度构建和沉降方式的不同,又可以分为速率区带离心法和等密度梯度离心法,前者主要根据颗粒的沉降速率分离,介质密度均小于外泌体密度,离心时样品在向超速离心管底部移动时,会通过密度不断增加的密度梯度区带,密度大的颗粒更容易穿过密度更高的梯度层,更快地到达管底,因此控制离心的时间很重要;等密度梯度离心法中的密度梯度区带,则会根据样品液中各种溶质成分来进行组合,离心过程中,无论离心时间多久,不同密度颗粒jin会富集到具有相同密度的梯度区带,而不会沉淀到底部。

获得囊泡粒径分布的两种方法动态光散射(DLS)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)都被广fan应用于外泌体颗粒数目和粒径分布的测量，但两种方法也各有不足。动态光散射法中散射光强度依赖于颗粒质量(体积)，混合体系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)将严重影响测量结果，因此动态光散射法更适用于单分散体系。而且动态光散射法所得的结果强烈依赖于所应用的数学算法。而采用纳米颗粒跟踪分析仪对不同粒径范围的囊泡进行检测时，为了得到准确的浓度和粒径信息，需要根据所要测量的颗粒粒径范围对仪器分别校准，操作繁琐。受检测灵敏度所限，纳米颗粒跟踪分析仪适用于粒径范围50nm～1μm的颗粒，粒径小于50nm的外泌体无法检测。除此之外，两种方法都依赖光散射和粒子的布朗运动进行分析，难以区分合成的纳米材料、大蛋白质聚合体和生物囊泡。外泌体的形成始于细胞内陷，成熟于多囊泡胞内体，终于膜融合。

外泌体中存在着某些特定的蛋白质、脂质和多糖,基于抗原–抗体特异性识别和结合作用原理,可将外泌体从其他组分中分离出来。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜联蛋白、上皮细胞黏附分子或肝素等都可以作为抗原,而捕获外泌体的抗体可以附着在平板、磁珠、二氧化硅、树脂、膜亲和过滤器、纤维素滤膜、聚酰氨基胺树状聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶联免疫吸附法和磁珠法等。酶联免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作为抗体附着介质,其结果用吸光度值表示,该方法可以快速分析已知表面生物标志物的表达,也可以瞬时读出外泌体的产量和特异性。磁珠法多使用共价包覆链霉亲和素的磁珠,与样品一起孵育后可通过磁泳将被结合的外泌体从样品组分中分离出来。鉴于微米级磁珠可赋予更大的接触面积,该方法不jin具有高度特异性,还具有比超速离心更高的外泌体产率。高浓度集聚诱导细胞死亡的TNF-α，可使类风湿关节炎恶化。浙江外泌体脂质组学

随着今后的研究发展，外泌体功能逐步清晰，并扩大临床应用。外泌体原液

中流细胞分泌的外泌体可以通过体液进入特定qi官，建立有利于ai细胞生长的微环境，包括促进受体细胞上皮细胞-间充质转化、引发炎症、促进血管生成，为ai细胞的扩散形成有利条件。进一步研究发现中流细胞外泌体能够引导ai症转移至特定qi官，在膜表面特异性整合素的作用下，中流细胞外泌体首先在特定的qi官累积，引起受体qi官产生炎症、生成血管，形成有利于中流转移的微环境，使得中流细胞更容易转移至该qi官。Maji等揭示了恶性中流细胞外泌体中的AnnexinⅡ蛋白能够促进血管生成，为中流转移创造有利的微环境。外泌体原液