外泌体鉴定

外泌体递送药物的优势：许多新的候选药物（例如蛋白质和核酸）在体内环境中高度不稳定，对诊疗结果的效果提出了重大挑战。鉴于与许多当前的纳米微粒递送系统相关的问题，外泌体作为“自然的递送系统”允许递送这些生物分子。由于外泌体体积小和其本身就是细胞产物，通过外泌体递送药物可以避免巨噬细胞的吞噬作用或降解，还可以在体内长时间循环，保持效果。其中，外泌体能够穿过血脑屏障以将特定药物输送到中枢的神经系统是外泌体递送药物的一个明显优势。NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。外泌体鉴定

外泌体的提取分离的方法：1、超速离心法（差速离心）：超离法是较常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。2、密度梯度离心：在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，是一种区带分离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高，但步骤繁琐，耗时。腹膜透析液外泌体脂质组学外泌体显示出了在诊疗各种疾病（如心肌病和神经病）方面的潜力。

外泌体的提取、纯化和鉴定：每一个外泌体研究者较初都要为外泌体的分离提取而烦恼。选择的分离方式是利用超速离心的方式分离外泌体，并且可以选用梯度密度离心法得到纯度更高的外泌体。另外利用外泌体自身的物理化学性质所研发的各种市售的外泌体分离提取试剂盒也能达到分离效果。提取的外泌体的鉴定方式主要是通过形态学、粒子大小以及标志蛋白等方式实现的。近来的研究发现外泌体在比较多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、瘤子的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能比较好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此是一种比较好靶向给药系统。

细胞外小泡通过充当脂肪组织、肝脏、骨骼肌和免疫细胞之间的细胞间通讯方式，在肥胖及其代谢并发症的发展中发挥作用。外泌体可能在外周胰岛素敏感性的调节中起作用，外周胰岛素敏感性是T2D发病机理的主要组成部分。外泌体似乎通过至少两种不同的机制来调节胰岛素敏感性，即通过调节炎症或通过与胰岛素反应性部位的直接相互作用。后者可通过与主要胰岛素信号分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号通路）相互作用而影响胰岛素信号通路而直接或间接发生。与对照组相比，糖尿病患者的血浆EV含量更高，并且与对照组相比，糖尿病小鼠的血浆外泌体数量也更高。然而，确定外泌体的作用及其在肝/肠轴通讯中的潜在作用将需要对它们的组成有更好的了解，特别是饮食是否会改变肠源性外泌体的含量，因此就胰岛素反应而言它们的生物学功能尚未研究。外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间，并将各种生物活性分子（货物）转运至靶细胞。

ELISA与WB的原理一样，在抗体包被的微孔板中加入待测样品、封闭、一抗孵育，洗涤后加入酶标待测物形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，彻底洗涤后加显色剂并用酶标仪测定吸光值，结尾用标准曲线计算外泌体表达量。ELISA能实现对外泌体特异性蛋白的定量。其他外泌体鉴定方法还有微流体测定法和外泌体蛋白质组学分析等。由于外泌体在各种生命过程中的重要作用及其作为疾病生物标志物和药物输送系统的潜力，人们对此领域的兴趣越来越高。尽管目前在技术上取得了长足的进步，但尚未建立对外泌体进行准确和标准化鉴定以及定量的方法，关于外泌体的量应由囊泡颗粒的数量、囊泡蛋白的量或囊泡数与蛋白之比来定义仍存在比较多争论。建立外泌体分离、表征以及效价测定的标准化方法将是外泌体作为诊断和诊疗用途之前需要解决的问题。外泌体可由间充质干细胞、淋巴细胞和瘤子细胞等多种类型细胞主动分泌释放。体液外泌体提取试剂盒成分

外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体鉴定

外泌体的生物发生和鉴定。液体和细胞外成分，如蛋白质、脂类、代谢物、小分子和离子，可以通过内吞作用和质膜内陷，与细胞表面蛋白一起进入细胞。由此产生的胞腔侧质膜芽的形成表现为质膜的外-内取向。这一出芽过程导致芽的形成可能与内质网、跨高尔基网络(TGN)和线粒体预先形成的早期核内体融合。ESEs也可以与ER和TGN融合，这可能解释了内吞物如何到达它们的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。外泌体鉴定

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