北京外泌体荧光标记

胞外囊泡和外泌体的异质性。细胞外囊泡的两大类是胞外体和外泌体。胞外体通过质膜出芽释放，大小在50~1mm之间。外泌体起源于内泌体途径，通过形成包含ILVs的ESEs、LSEs，较终形成多泡体。当MVBs与质膜融合时，外泌体释放(尺寸范围~40~160nm)。外泌体是一个高度异质性的群体，具有独特的诱导复杂生物学反应的能力。外泌体的异质性可以根据其大小、含量(载物)、对受体细胞的功能影响以及细胞来源来概念化。这些特征的不同组合导致了外泌体的复杂异质性。外泌体的细胞源：人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体。北京外泌体荧光标记

外泌体生物学功能：1、在心血管系统中，据报道，源自人胚胎干细胞（ESC）的间充质干细胞（MSC）外泌体可减少小鼠和猪模型中的心肌缺血和再灌注损伤；2、在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制；3、在中枢的神经系统中，外泌体的作用是消除废物并介导大脑活动，从而阻止神经退行性疾病的发病机理；迄今为止，尚未完全发现调节外泌体-细胞结合的途径。然而，比较明显，其结合过程从外泌体识别受体细胞PM上的特定受体开始。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础，它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃，外泌体与PM融合或外泌体的内吞作用，从而导致蛋白质和RNA直接释放到受体细胞中。外泌体用的外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间，并将各种生物活性分子（货物）转运至靶细胞。

近年来，外泌体的捕获技术越来越多，微流体系也被用于外泌体提取，此方法能根据其物理和生化特性同时分离外泌体。采用这种方法获得的样品纯度高，且可及时获取外泌体用于疾病的相关检测。在初次注射时外泌体粘附在微流控设备的内表面，并在随后的PBS注射中冲洗掉。此方法采用的设备复杂，所需的样本量取决于流动通道的长度。另外，样品量的注入速率比较低，因此，对于大样品量，将需要较长的处理时间。外泌体在包括瘤子在内的各种疾病的发病机理中具有重要的功能。目前，研究人员已经开发了多种方法来分离外泌体，离心技术仍然是常用方法，其他方法，例如过滤、磁珠分离和色谱法等，也显示出独特的优势，但目前仍然没有一种公认有效的提取方法，研究人员应针对不同来源的样本以及不同的下游分析选取较适宜的提取方案。

为什么超速离心提取外泌体看不到沉淀？答：这种问题通常有三种可能性，其一：使用的细胞上清或者血清量太低，从而造成了这样的结果。其二：使用了不透明的超速离心管，一般来说外泌体产量都比较小，所以凡是不透明的管子，基本都是比较难见到明显沉淀的，可以当做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角转。部分品牌离心机的角转管壁粘附性比较低，超离结束没多久沉淀就会滑落下去，所以请在离心结束时赶紧去收样。外泌体的角色：1、外泌体发挥功能并一定需要受体细胞摄入外泌体：外泌体的膜蛋白有可能与细胞膜蛋白作用，活跃细胞内通路。2、外泌体的角色之一：细胞-细胞通讯，比如抗原递呈。外泌体功能在研究初期阶段发现是参与细胞成熟过程中去除不必要的蛋白质。

外泌体为细胞疗法中的不同合成分子和生物分子的递送提供了广阔的前景和崭新的诊疗领域。外泌体还显示出了在诊疗各种疾病（如心肌病和神经病）方面的潜力。但是，在实际应用外泌体之前，需要使用大型动物模型进行进一步研究和临床试验。同时需要开发大规模生产质量可控的外泌体并快速纯化外泌体的技术和策略。另外，在研究和评估外泌体的副作用和功效时，必须考虑到肉瘤细胞来源的外泌体可能增强肉瘤生长的潜在风险。外泌体给药途径：给药途径是获得所需功效的重要参数。外泌体可以通过多种方法给药，但是，静脉内给药是较常用的途径。通过利用增强通透性和保留（EPR）效应，在荷瘤动物中静脉内递送外来体似乎是有用的。在某些容易达到肉瘤部位的不同恶性肉瘤中，外泌体疗法的给药途径是瘤内注射。在疾病部位直接注射外泌体的优点是可以特异性地运送装载的药物。另外口服给药，腹腔给药，皮内给药和鼻内给药途径已成功用于外泌体递送。在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制。河南外泌体miRNA测序

多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。北京外泌体荧光标记

外泌体的临床应用：间充质干细胞是目前较普遍使用的细胞类型，它具有自我更新，多向分化、分泌细胞因子和细胞外囊泡体、免疫调节、来源普遍等特点，在流感病毒的临床诊疗中取得了良好的成果。间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，包括修复与再生组织、阻止炎症反应及调节机体免疫，但外泌体相对于间充质干细胞又有许多优势。首先，间充质干细胞来源外泌体更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量。其次，它们没有活细胞，不会像间充质干细胞那样可能会过多增殖而放大疗效或者病变导致疾病加重；另外，它有可能避免某些针对间充质干细胞的调控问题，间充质干细胞来源外泌体有代替间充质干细胞的趋势。北京外泌体荧光标记

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